本試劑盒基于PCR核酸擴增技術(shù)，針對布氏岡比亞錐蟲特異性基因序列設(shè)計專屬擴增體系，專注于布氏岡比亞錐蟲的定性檢測。該病原是非洲人類錐蟲病的主要致病菌之一，傳播性強、危害大，本試劑盒檢測特異性高，可精準區(qū)分岡比亞錐蟲與其他錐蟲蟲種，檢測周期短、結(jié)果穩(wěn)定可靠，能夠為臨床病例診斷、疫區(qū)監(jiān)測及出入境疫病檢疫提供精準的技術(shù)支撐。
產(chǎn)品名稱 | 布氏岡比亞錐蟲PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P014882 |
英文名稱 | Trypanosoma brucei gambiense | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
引物匹配布氏岡比亞錐蟲特異性 DNA 序列，可排除同亞種其他錐蟲干擾。
對患者血液、腦脊液樣本進行核酸提取純化，制備 PCR 模板。
通過檢測特異性擴增片段，確診是否存在布氏岡比亞錐蟲感染。
?操作步驟?：
（一）反應(yīng)體系配制（冰上操作，防酶失活與污染）
按 “水→緩沖液→dNTP→引物→模板→Taq 酶” 順序加樣（酶最后加，避免失活）。
輕輕渦旋混勻，短暫離心（3000rpm，10s），使液體沉至管底。
無熱蓋的 PCR 儀：加 1 滴礦物油覆蓋液面，防止蒸發(fā)。
（二）PCR 程序設(shè)置（標準 35 循環(huán)）
預(yù)變性：94℃，3-5min（徹底變性模板 DNA）。
循環(huán)階段（35 次）：
變性：94℃，30s（雙鏈解鏈）。
退火：55-65℃，30s（引物結(jié)合模板，按引物 Tm 值調(diào)整）。
延伸：72℃，1min/kb（Taq 酶合成新鏈，1kb 片段約 1min）。
終延伸：72℃，5-10min（確保片段完整延伸）。
保溫：4℃，∞（防止非特異性復性，短期保存）。
（三）產(chǎn)物檢測（瓊脂糖凝膠電泳）
制膠：1% 瓊脂糖凝膠（1g 瓊脂糖 + 100mL 1×TAE 緩沖液），加熱融化后加核酸染料，倒膠插梳，凝固 30min。
上樣：取 5μL PCR 產(chǎn)物 + 1μL 上樣緩沖液，點樣；同時加 DNA Marker（分子量對照）。
電泳：120V，20-30min，至溴酚藍遷移至凝膠 2/3 處。
成像：凝膠成像系統(tǒng)觀察條帶，目標片段位置與預(yù)期一致則為陽性。
四、參數(shù)優(yōu)化
退火溫度（Tm）：引物 Tm 值 = 4×(G+C)+2×(A+T)，退火溫度一般低于 Tm 值 5℃，溫度過高無條帶，過低非特異性條帶多。
Mg2?濃度：1.5-2.5mM，濃度過低酶活性低、產(chǎn)量少；過高非特異性擴增增加。
循環(huán)數(shù)：25-35 個循環(huán)，少于 25 個產(chǎn)物不足，多于 35 個易出現(xiàn)非特異性條帶。
延伸時間：按目標片段長度調(diào)整，≤1kb 用 1min，1-3kb 用 2-3min。
?注意事項?：
試劑禁止反復凍融，分裝為小體積 - 20℃保存，融化后冰上放置不超過 2 h
所有耗材必須無 DNase/RNase，吸頭一次性使用，廢液、廢棄 PCR 管 121℃高壓滅菌后丟棄
陽性質(zhì)粒高拷貝，開蓋全程在生物安全柜操作，防止氣溶膠污染實驗室
試劑盒僅限科研檢測，禁止人、臨床樣本檢測
試劑盒過期、試劑渾濁、變色禁止使用
若大量樣本出現(xiàn)陰性對照帶污染，立即更換全新試劑盒，徹底紫外消毒實驗臺面、移液器
公司正在出售的產(chǎn)品：
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