本試劑盒為熒光定量PCR檢測(cè)產(chǎn)品，可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)霍亂弧菌核酸擴(kuò)增過程，不僅能定性判定菌株存在，還可精準(zhǔn)定量檢測(cè)病原載量。檢測(cè)靈敏度更高、結(jié)果重復(fù)性好、抗干擾能力強(qiáng)，可檢出微量低載量病原，適用于霍亂早期隱匿感染篩查、環(huán)境微量污染監(jiān)測(cè)、治療效果動(dòng)態(tài)評(píng)估及疫情精準(zhǔn)防控。
產(chǎn)品名稱 | 霍亂弧菌熒光PCR檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P015059 |
英文名稱 | Vibrio cholerae Fluorescent PCR Detection Kit | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
搭配 TaqMan 特異性探針，探針僅結(jié)合霍亂弧菌靶基因，擴(kuò)增時(shí)釋放熒光實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)檢測(cè)。
可通過 Ct 值快速判定樣本陰陽性，相較于普通凝膠電泳檢測(cè)速度更快。
封閉管內(nèi)擴(kuò)增檢測(cè)，無需開蓋電泳，大幅降低實(shí)驗(yàn)室核酸氣溶膠污染風(fēng)險(xiǎn)。
?操作步驟?：
DNA提?。颖局苽鋮^(qū)）
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA，確保無抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（樣本制備區(qū)）
標(biāo)記6支離心管為7至2號(hào)，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用帶濾芯槍頭）。
梯度稀釋陽性對(duì)照：
7號(hào)管：加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽性對(duì)照，震蕩混勻，得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品；
依次稀釋至2號(hào)管，最終濃度跨5個(gè)數(shù)量級(jí)（1×10^7至1×10^3拷貝/μL）。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用，避免反復(fù)凍融。
試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻，短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL，含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣（樣本處理區(qū)）
分別加入5 μL待測(cè)DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管，陰性對(duì)照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋，避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
按以下程序運(yùn)行定量PCR儀：
預(yù)變性：95℃ 2分鐘；
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）；
熔解曲線分析（可選）。
?注意事項(xiàng)?：
分區(qū)操作：試劑配制、樣品處理、PCR擴(kuò)增需在獨(dú)立區(qū)域進(jìn)行，避免交叉污染
無菌操作：使用帶濾芯槍頭、一次性手套和專用工作服
試劑準(zhǔn)備：所有試劑使用前需完全融化，震蕩混勻后短暫離心
避光保存：含熒光探針的試劑需避光保存和操作
防止污染：陽性對(duì)照操作需最后進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作臺(tái)
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