?產(chǎn)品名稱:馬腺疫鏈球菌PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Streptococcus equi subsp. equi (Strangles Streptococcus) PCR Detection Kit
貨號(hào):YS-P015128
分類:PCR檢測(cè)試劑盒
規(guī)格?:50T/盒
檢測(cè)原理:
提取樣本中馬腺疫鏈球菌基因組 DNA,利用特異性引物靶向菌種保守毒力基因,經(jīng) Taq 酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增,熒光信號(hào)同步累積實(shí)現(xiàn)定性檢出。
以鏈球菌特異性 16S rDNA 序列為擴(kuò)增靶標(biāo),通過變性 - 退火 - 延伸循環(huán)放大微量核酸,依據(jù)擴(kuò)增曲線判斷菌株存在與否。
樣本核酸純化后與試劑盒探針、引物混合,僅馬腺疫鏈球菌模板可觸發(fā)特異性擴(kuò)增,無靶菌則無熒光擴(kuò)增信號(hào)。
實(shí)驗(yàn)流程:
1. DNA提取(樣本制備區(qū))
使用自選方法或兼容試劑盒提取樣本DNA,建議濃度≥10 ng/μL,A260/A280比值1.8-2.0。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備(獨(dú)立操作區(qū))
標(biāo)記6管為梯度稀釋點(diǎn)(如7-2),每管加45 μL DEPC水。
取5 μL陽(yáng)性對(duì)照依次稀釋,混勻后作為標(biāo)準(zhǔn)品(避免污染)。
3. PCR反應(yīng)體系配制(試劑配制區(qū))
按以下比例配制(示例):
| 組分 | 體積(μL) |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上機(jī)檢測(cè)
程序設(shè)置:預(yù)變性95℃ 3 min;40循環(huán)(95℃ 10 s, 60℃ 30 s);熔解曲線分析。
數(shù)據(jù)分析:根據(jù)Ct值及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
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注意事項(xiàng):
1、實(shí)驗(yàn)分區(qū)管理?
實(shí)驗(yàn)全程需嚴(yán)格劃分三個(gè)獨(dú)立區(qū)域:?試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)?,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、移液器及耗材?嚴(yán)禁混用?,防止交叉污染。
?2、防止污染操作?
使用帶濾芯槍頭,每步更換槍頭;
陽(yáng)性對(duì)照操作應(yīng)在專用生物安全柜中進(jìn)行,避免污染其他試劑;
加樣后立即蓋緊管蓋,避免氣溶膠擴(kuò)散。
?3、試劑保存與使用?
所有試劑需?-20℃避光保存?,避免反復(fù)凍融,確保穩(wěn)定性;
使用前于冰上解凍并輕柔混勻,瞬時(shí)離心后使用。
關(guān)鍵字: 馬腺疫鏈球菌 ;PCR檢測(cè)試劑盒;
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