Recombinant Mouse CX3CL1規(guī)格
CX3CL1具有獨特的雙重功能，既可作為膜結(jié)合型分子介導(dǎo)細胞黏附，也可經(jīng)蛋白酶（如ADAM10/17）剪切后以可溶性形式發(fā)揮趨化活性。它作為G蛋白偶聯(lián)受體CX3CR1的唯一配體，對表達該受體的免疫細胞（如單核細胞、NK細胞和T細胞）具有強烈的趨化作用，并參與調(diào)節(jié)白細胞的黏附與遷移。重組小鼠CX3CL1蛋白主要用于免疫學(xué)、神經(jīng)科學(xué)及腫瘤學(xué)等領(lǐng)域，研究細胞遷移、炎癥反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)等基礎(chǔ)科學(xué)問題。
商品介紹：
A-01K99887-50μg | Recombinant Mouse CX3CL1規(guī)格 |
A-01K99887-200ug | Recombinant Mouse CX3CL1規(guī)格 |
A-01K99887-1mg | Recombinant Mouse CX3CL1規(guī)格 |
別稱：A 152E5.2, AB030188, ABCD 3, ABCD3, AI848747, C-X3-C motif chemokine 1, C3Xkine, Chemokine (C-X3-C motif) ligand 1, Chemokine C X3 C motif ligand 1, Chemokine CX3C Motif Ligand 1, CX3C membrane anchored chemokine, CX3C membrane-anchored chemokine, Cx3cl1, CXC 3, CXC3, CXC3C, D8Bwg0439e, FKN, Fractalkine, Neurotactin, NTN, NTT, Processed fractalkine, SCYD 1, SCYD1, Small inducible cytokine D1
標(biāo)簽：N-terminal His Tag
種屬：Mouse
宿主：E.Coli
表達區(qū)間：25-100
分子量：8.3 kDa
Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
應(yīng)用：Western Blot, ELISA
性狀：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
純度：Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存儲:-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
檢測原理詳解：
包被抗體結(jié)合
實驗開始前，微孔板已預(yù)先包被抗人白脂素單克隆抗體。當(dāng)加入待測樣本后，
樣本中的人白脂素（Asprosin）會與固相載體上的捕獲抗體特異性結(jié)合。
形成“夾心復(fù)合物”
洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后，加入生物素標(biāo)記的檢測抗體，該抗體與白脂素分子的另一表位結(jié)合，
形成“固相抗體—抗原—檢測抗體”三明治結(jié)構(gòu)。
酶促顯色反應(yīng)
隨后加入?辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，與生物素檢測抗體結(jié)合。
最后加入TMB顯色底物，在HRP催化下產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，反應(yīng)終止后變?yōu)辄S色。
濃度定量分析
黃色深淺與樣本中白脂素含量成正比，通過酶標(biāo)儀在450nm波長處測定吸光度（OD值），
并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣本中白脂素的濃度。
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實驗步驟：
1. 基因克隆與表達載體構(gòu)建
從人類FBN1基因C端序列中擴增Asprosin編碼片段（約140aa）。
將目的片段插入原核表達載體，確保帶有?N端或C端His標(biāo)簽，便于后續(xù)純化。
轉(zhuǎn)化至?感受態(tài)細胞，篩選陽性克隆并測序驗證。
2. 重組蛋白誘導(dǎo)表達
取陽性菌落接種于LB培養(yǎng)基（含氨芐青霉素），37℃振蕩培養(yǎng)過夜。
次日按1:100比例轉(zhuǎn)接至新鮮LB培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)至OD600達0.6–0.8。
加入IPTG至終濃度0.1–1.0 mM，16–25℃誘導(dǎo)表達6–12小時（低溫誘導(dǎo)有助于可溶性達）。
4℃、8000×g離心10分鐘收集菌體，棄上清，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
3. 菌體裂解與蛋白提取
將菌體沉淀重懸于裂解緩沖液（如PBS + 1% Triton X-100 + 蛋白酶抑制劑），超聲破碎
（冰浴條件下，每次30秒，共6–10次，功率30%）。
4℃、12000×g離心20分鐘，收集上清（可溶性蛋白）或沉淀（包涵體蛋白）。
若為包涵體蛋白，需用?洗滌緩沖液（含2M尿素的PBS）洗滌2–3次，去除雜蛋白。
4. 親和層析純化（Ni-NTA法）
將含His標(biāo)簽的蛋白溶液（或溶解后的包涵體蛋白，使用含6–8M尿素的緩沖液溶解）上樣至?Ni-NTA親和層析柱。
用?洗滌緩沖液（含20–40mM咪唑）洗去非特異性結(jié)合蛋白。
用?洗脫緩沖液（含250–500mM咪唑）梯度洗脫目標(biāo)蛋白，收集洗脫峰。
透析去除尿素與咪唑（使用PBS或生理緩沖液，4℃過夜，更換3次）。
5. 蛋白復(fù)性（針對包涵體蛋白）
若蛋白以包涵體形式表達，需在純化后進行?梯度復(fù)性：
將變性蛋白緩慢加入含?梯度降低尿素（6M → 4M → 2M → 0M）的復(fù)性緩沖液中，4℃攪拌過夜?；虿捎?透析法?逐步去除變性劑。復(fù)性后再次離心取上清，檢測蛋白活性。
關(guān)鍵字： CX3CL1;Mouse;E.Coli;
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