產(chǎn)品名稱：人Src激酶關(guān)聯(lián)磷蛋白2(SKAP2)ELISA試劑盒
產(chǎn)品靈敏度：7.8pg/ml
產(chǎn)品檢測范圍：31.25–2000pg/mL
檢測原理
聯(lián)邁生物生產(chǎn)的 ELISA 試劑盒采用“夾心法 ”:將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上，捕獲樣品及標(biāo) 準(zhǔn)品中的靶蛋白，生物素化的檢測抗體與靶蛋白結(jié)合， SABC 復(fù)合物與生物素化檢測抗體結(jié) 合，形成免疫復(fù)合物，加入 TMB 顯色液后，若反應(yīng)孔中有靶蛋白則顯藍(lán)色，加入終止液變黃 色，檢測過程中游離的成分均被洗去，用酶標(biāo)儀在450 nm 處測OD 值，靶蛋白濃度與OD 值之 間呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出標(biāo)本中靶蛋白的濃度。
按操作順序形成抗體夾心結(jié)構(gòu)后，加入TMB 底物，板孔液體由無色變成藍(lán)色，再加入終止液 液體變?yōu)辄S色后進(jìn)行吸光度值測定。
雙抗體夾心模式圖
試劑盒組分:(保存溫度4℃)
| 名稱 | 規(guī)格一（48T） | 規(guī)格二（96T） | 儲存條件 |
| 預(yù)包被酶標(biāo)板 | 8×6條 | 8×12條 | 未用完的酶標(biāo)板密封干 燥保存可于 2-8 ℃儲存至 多1個月。 |
SKAP2標(biāo)準(zhǔn)品（紅 色） | 1支×100μL | 2支×100μL | 每次測試按需配置標(biāo)準(zhǔn) 品，剩余置于-20 ℃儲存 至多6個月。 |
100×生物素化抗體（粉 色） | 1 支×60μL | 1支×120μL | 每次測試按需配置抗體 工作液,剩余置 于-20℃ 儲存至多6個月。 |
濃縮ABC復(fù)合物(稀釋1： 100)(綠色蓋) (親和素生物素過氧化物 酶復(fù)合體) | 1支×60μL | 1支×120μL | 每次測試按需配置酶結(jié) 合物工作液,剩余置于- 20 ℃儲存至多6個月。 |
20×濃縮稀釋液（紫色 ) | 1支×15mL | 1支×30mL | 于2-8 ℃可保存至有效期末。 |
TMB顯色底物) (棕色瓶) | 1支×5mL | 1支×10mL |
終止液（黃色） | 1支×5mL | 1支×10mL |
20×濃縮洗滌液（藍(lán)色 ) | 1支×15mL | 1支×30mL |
封板膠紙 | 2張 | 2張 |
產(chǎn)品說明書 | 1份 | 1份
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實(shí)驗(yàn)所需材料
酶標(biāo)儀，包含450nm測定波長，建議配置包含600-680nm校正波長，采用雙波長檢測；
移液器及槍頭、蒸餾水或去離子水、計(jì)量器具、帶刻度的燒杯、量筒等耗材和容器具；
水平軌道微孔板振蕩器、計(jì)時器、瓶、排槍或微孔板洗板機(jī)等輔助；
用于稀釋校準(zhǔn)品和樣品的離心管、干凈的吸水紙、以及其他實(shí)驗(yàn)可能需要用到的器具；
標(biāo)本收集及試劑準(zhǔn)備:
1、樣品預(yù)處理
下面列出的樣品收集和儲存條件旨在作為一般性指導(dǎo)。樣品穩(wěn)定性尚未評估。
a) 細(xì)胞培養(yǎng)上清液：在 1000×g 下離心 15 分鐘去除顆粒，立即進(jìn)行測定或等分裝樣品，并 將樣品儲存在≤-20℃的溫度下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。（細(xì)胞培養(yǎng)上清液樣品建議 2 倍稀 釋。例如：100 μL 樣品+100 μL 的 1×稀釋液）
b) 血清：使用血清分離管，使樣品在室溫下凝結(jié) 30 分鐘，然后在 1000×g 下離心 15 分鐘。 立即取出血清并進(jìn)行測定或等分裝樣品，將樣品儲存在≤-20℃的溫度下。避免重復(fù)凍融 循環(huán)。（血清樣品建議 2 倍稀釋。例如：50 μL 樣品+50 μL 的 1×稀釋液）
c) 血漿：使用EDTA 或肝素作為抗凝劑收集血漿。收集后 30 分鐘內(nèi)，以 1000×g 離心 15 分 鐘。立即測定或等分裝樣品，并將樣品儲存在≤-20℃的溫度下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
（血漿樣品建議 2 倍稀釋。例如：50μL 樣品+50 μL 的 1×稀釋液）注：檸檬酸鹽抗凝劑 血漿未經(jīng)驗(yàn)證可用于本試驗(yàn)，使用時應(yīng)自行驗(yàn)證可行性。溶血的樣品不適合用于該測定。
d) 組織勻漿：用預(yù)冷的 PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞 會影響檢測結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的 PBS（一般按 1:9 的 重量體積比，比如 1g 的組織樣品對應(yīng)9mL 的 PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整， 并做好記錄。推薦在 PBS 中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨或 勻漿機(jī)研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最 后將勻漿液于 5000×g 離心 5-10 分鐘，取上清檢測。
e) 細(xì)胞裂解液：貼壁細(xì)胞用預(yù)冷 PBS 輕輕清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g 離心 5 分鐘 后收集細(xì)胞；懸浮細(xì)胞可直接離心收集。收集的細(xì)胞用預(yù)冷 PBS 清洗 3 次，每 1×106 個 細(xì)胞中加入 150-200 μL 的 PBS 重懸（推薦在 PBS 中加入蛋白酶抑制劑；若含量很低可適 當(dāng)減少 PBS 體積）并通過反復(fù)凍融或超聲使細(xì)胞破碎。將提取液于 2-8℃ , 1500×g 離心 10 分鐘，取上清檢測。
f) 其它樣本類型：1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測。
2、洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液（20×) 有晶體析出，需在 37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水 1:20 稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液/稀釋液加入 19mL 的蒸餾水）
3、標(biāo)準(zhǔn)品配置
取 8 個 1.5ml 離心管，分別標(biāo)注 S1,S2,S3,S4,S5,S6,S7,blank,第一管 S1 中加入標(biāo)準(zhǔn)品/ 樣品稀釋液900ul，第二至第八管中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液 200ul，在第一管中加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液(20000pg/ml)100ul 置于漩渦混合器上混勻后用加樣器吸出 200ul，移至第二管， 如此反復(fù)作對倍稀釋至S7，第八管為空白對照。配置好的標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度為:2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0ng/ml（標(biāo)準(zhǔn)品的用量及標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍也可根據(jù)自己需要配置）。
4、生物素化抗體工作液配置
使用前 20 分鐘，用生物素化抗體稀釋液將 100×生物素化抗體稀釋成 1×工作液，根據(jù)所需 用量配置，當(dāng)日使用，剩余棄之。
5、SABC 工作液配置
使用前 20 分鐘，用 SABC 稀釋液將 100×SABC 稀釋成 1×工作液，根據(jù)所需用量配置，當(dāng)日 使用，剩余棄之
6、如果您檢測的樣本中靶蛋白濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，建議重新檢測，請根據(jù)實(shí)際情況，適 當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù))。
檢測程序:
1. 加樣：空白孔加入 100 μ l 標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液，其余孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul， 將反應(yīng)板混勻后置 37℃ , 60 分鐘。
2. 洗板：用 1×洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 3 次，每孔加入 1×洗液 300 μ l，每次震蕩/浸泡 1-2 分鐘，向?yàn)V紙上印干。
3. 空白孔加入 100ul標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液，其余孔各加入 1×的生物素化抗體工作液 100ul， 混勻后置 37℃ , 60 分鐘。
4. 洗板：同上。
5. 每孔加入 SABC 工作液 100ul，混勻后置 37℃ , 30 分鐘。
6. 洗板：同上。
7. 每孔加入 TMB 顯色底物 100ul，混勻后置 37 ℃暗處反應(yīng) 10-20 分鐘（具體顯色時間根據(jù) 顯色結(jié)果而定）。
8. 每孔加入 50ul 終止液，混勻，5 分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 450nm 處測吸光值。
結(jié)果判斷和計(jì)算
1. 所有 OD 值建議減除空白孔值后再進(jìn)行計(jì)算，如空白孔 OD 低于0.1，也可以直接計(jì)算。
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD 值作縱坐標(biāo)，手工繪制或用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品 OD 值計(jì)算出相應(yīng)含量，再乘以稀釋倍數(shù)即可。
關(guān)鍵字： SKAP2;Src激酶關(guān)聯(lián)磷蛋白2;SKAP2試劑盒;人SKAP2 ELISA試劑盒;
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服務(wù)”，公司擁有一批基礎(chǔ)知識扎實(shí)、產(chǎn)品知識豐富的銷售人員，以及在生命科學(xué)領(lǐng)域經(jīng)驗(yàn)豐富并且十分專業(yè)的技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)，隨時為客戶提供技術(shù)咨詢和售后服務(wù)。主營產(chǎn)品/服務(wù)：試劑盒：ELISA試劑盒、免疫組化試劑盒、分子生物學(xué)試劑盒、細(xì)胞凋亡試劑盒。細(xì)胞培養(yǎng)：血清，專業(yè)培養(yǎng)基，常用傳統(tǒng)培養(yǎng)基。耗材：進(jìn)口、國產(chǎn)細(xì)胞培養(yǎng)耗材、普通實(shí)驗(yàn)耗材。生化試劑：原裝進(jìn)口生化試劑、國產(chǎn)生化試劑。抗體：進(jìn)口原裝抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、一抗、二抗等等。蛋白/抗原：重組蛋白，多肽合成，天然蛋白，細(xì)胞因子。