微小細(xì)胞血癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體
原理特點
靶向MAF（Musculoaponeurotic fibrosarcoma）轉(zhuǎn)錄因子家族成員。MAF蛋白屬于堿性亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子，在紅細(xì)胞終末分化、晶狀體發(fā)育和T細(xì)胞功能中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用。該抗體用于研究紅細(xì)胞生成和MAF相關(guān)腫瘤。
英文名稱:MITF Rabbit pAb
中文名稱:微小細(xì)胞血癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:MITF_HUMAN; Microphthalmia-associated transcription factor; BHLHE32; Class E basic helix-loop-helix protein 32(bHLHe32); MI; WS2; CMM8; WS2A; COMMAD; MITF-A;
交叉反應(yīng):Human,Mouse
抗體來源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human MITF
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類型:Polyclonal
理論分子量：59 kDa
濃度：1mg/ml
儲存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點背景
MITF 屬于 MiT 家族 bHLH 轉(zhuǎn)錄因子，黑素細(xì)胞、破骨細(xì)胞、肥大細(xì)胞、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞譜系主控因子。
調(diào)控黑素合成、黑素細(xì)胞存活增殖；調(diào)控破骨細(xì)胞分化骨吸收功能；參與心臟、腎細(xì)胞發(fā)育。
黑色素瘤特征性標(biāo)志物，分型診斷、轉(zhuǎn)移風(fēng)險判斷；抗體用于區(qū)分黑色素瘤與其他上皮、間質(zhì)腫瘤。
核心實驗操作方法
1. Western Blot（WB）
抗體孵育
一抗孵育：用5%脫脂牛奶或BSA稀釋抗體至推薦濃度（如1:1000），4℃搖床緩慢孵育過夜；或室溫孵育1-2小時，孵育時保證膜完全浸沒在抗體溶液中。
洗滌：用TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘，洗去未結(jié)合的一抗；加入HRP標(biāo)記二抗（1:5000-1:10000稀釋），室溫孵育1小時。
顯影：再次洗滌后，加入ECL發(fā)光液孵育1-2分鐘，用化學(xué)發(fā)光成像儀采集圖像，根據(jù)信號強度調(diào)整曝光時間。
2. 免疫組化（IHC）
抗體孵育
一抗孵育：滴加稀釋后的一抗（如1:200）于組織切片上，置于濕盒中4℃孵育過夜；次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入生物素標(biāo)記二抗（1:200）室溫孵育30分鐘，PBS沖洗后加入ABC復(fù)合物（1:100）室溫孵育30分鐘。
顯色封片：DAB顯色劑顯色3-10分鐘（顯微鏡下觀察控制時間），蘇木素復(fù)染1分鐘，梯度乙醇脫水后中性樹膠封片。
3. 免疫熒光（IF）
抗體孵育
一抗孵育：用5% BSA稀釋抗體至工作濃度（如1:100），滴加在細(xì)胞爬片上，4℃避光孵育過夜；室溫復(fù)溫后PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入熒光標(biāo)記二抗（如FITC標(biāo)記抗兔IgG，1:200），室溫避光孵育30-60分鐘；PBS沖洗后用抗淬滅封片液封片。
觀察：熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察，激發(fā)波長根據(jù)二抗標(biāo)記物選擇（如FITC為488nm）。
4. ELISA實驗
包被與孵育
包被：用包被緩沖液（pH9.6碳酸鹽緩沖液）稀釋抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃過夜孵育。
封閉與一抗孵育：棄去包被液，PBST洗滌3次，加入5% BSA封閉液200μl/孔，37℃孵育1小時；加入稀釋后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小時或4℃過夜。
檢測：洗滌后加入酶標(biāo)二抗（1:5000），37℃孵育1小時；TMB底物溶液顯色10-30分鐘，2M硫酸終止反應(yīng)后，酶標(biāo)儀450nm波長讀取OD值。
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