細(xì)胞角蛋白7抗體
原理特點(diǎn)
CK7在腺上皮和移行上皮中表達(dá)，是肺腺癌、乳腺癌、卵巢癌和尿路上皮癌的標(biāo)志物。它與CK20的聯(lián)合表達(dá)模式是鑒別轉(zhuǎn)移癌原發(fā)灶的核心指標(biāo)。該抗體廣泛用于腫瘤病理診斷和不明原發(fā)灶的溯源。
英文名稱:CK7 Rabbit pAb
中文名稱:細(xì)胞角蛋白7抗體
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:Cytokeratin 7; Cytokeratin-7; CK 7; CK-7; K7; Keratin 7; Keratin, type II cytoskeletal 7; KRT7; SCL; K2C7_HUMAN.
交叉反應(yīng):Human,Mouse,Rat
抗體來源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from the middle of human CK7
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類型:Polyclonal
理論分子量：54 kDa
濃度：1mg/ml
儲(chǔ)存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項(xiàng)：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點(diǎn)背景
CK7 酸性 I 型角蛋白，廣泛表達(dá)肺、乳腺、膽管、卵巢、膀胱上皮；結(jié)直腸、前列腺、胃腸道遠(yuǎn)端上皮低表達(dá)。
轉(zhuǎn)移癌溯源核心指標(biāo)：CK7+/CK20- 多肺 / 乳腺 / 卵巢原發(fā)；CK7-/CK20+ 高度指向結(jié)直腸原發(fā)。
鑒別間皮瘤（CK7 陽性）與肺腺癌，區(qū)分膽管細(xì)胞癌、肝細(xì)胞癌（HCC CK7 陰性為主）。
核心實(shí)驗(yàn)操作方法
1. Western Blot（WB）
抗體孵育
一抗孵育：用5%脫脂牛奶或BSA稀釋抗體至推薦濃度（如1:1000），4℃搖床緩慢孵育過夜；或室溫孵育1-2小時(shí)，孵育時(shí)保證膜完全浸沒在抗體溶液中。
洗滌：用TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘，洗去未結(jié)合的一抗；加入HRP標(biāo)記二抗（1:5000-1:10000稀釋），室溫孵育1小時(shí)。
顯影：再次洗滌后，加入ECL發(fā)光液孵育1-2分鐘，用化學(xué)發(fā)光成像儀采集圖像，根據(jù)信號強(qiáng)度調(diào)整曝光時(shí)間。
2. 免疫組化（IHC）
抗體孵育
一抗孵育：滴加稀釋后的一抗（如1:200）于組織切片上，置于濕盒中4℃孵育過夜；次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入生物素標(biāo)記二抗（1:200）室溫孵育30分鐘，PBS沖洗后加入ABC復(fù)合物（1:100）室溫孵育30分鐘。
顯色封片：DAB顯色劑顯色3-10分鐘（顯微鏡下觀察控制時(shí)間），蘇木素復(fù)染1分鐘，梯度乙醇脫水后中性樹膠封片。
3. 免疫熒光（IF）
抗體孵育
一抗孵育：用5% BSA稀釋抗體至工作濃度（如1:100），滴加在細(xì)胞爬片上，4℃避光孵育過夜；室溫復(fù)溫后PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入熒光標(biāo)記二抗（如FITC標(biāo)記抗兔IgG，1:200），室溫避光孵育30-60分鐘；PBS沖洗后用抗淬滅封片液封片。
觀察：熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察，激發(fā)波長根據(jù)二抗標(biāo)記物選擇（如FITC為488nm）。
4. ELISA實(shí)驗(yàn)
包被與孵育
包被：用包被緩沖液（pH9.6碳酸鹽緩沖液）稀釋抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃過夜孵育。
封閉與一抗孵育：棄去包被液，PBST洗滌3次，加入5% BSA封閉液200μl/孔，37℃孵育1小時(shí)；加入稀釋后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小時(shí)或4℃過夜。
檢測：洗滌后加入酶標(biāo)二抗（1:5000），37℃孵育1小時(shí)；TMB底物溶液顯色10-30分鐘，2M硫酸終止反應(yīng)后，酶標(biāo)儀450nm波長讀取OD值。
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關(guān)鍵字： 細(xì)胞角蛋白7抗體;Rabbit;54 kDa;
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