細胞色素c氧化酶IV亞型1（內(nèi)參）單克隆抗體
原理特點
特異性識別COX IV亞型1，是核編碼的線粒體蛋白，組成性表達穩(wěn)定。它在Western blot中作為線粒體蛋白的內(nèi)參對照，校正線粒體提取物的上樣量差異。該單抗是線粒體功能研究的常用內(nèi)參。
英文名稱:COX4I1 Mouse mAb, Mitochondrial Loading Control
中文名稱:細胞色素c氧化酶IV亞型1（內(nèi)參）單克隆抗體
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:COX41_HUMAN; Cytochrome c oxidase subunit 4 isoform 1, mitochondrial; COX4; Cytochrome c oxidase polypeptide IV; Cytochrome c oxidase subunit IV isoform 1(COX IV-1); COX-IV; COX IV; COX 4; COX 4I1;
交叉反應:Human,Mouse,Rat
抗體來源:Mouse
免疫原:Recombinant human COX4
亞型:IgG
性狀:Size : 50ul/100ul/500ul LiquidSize : 200ug (PBS only) Lyophilized Note: Centrifuge tubes before opening. Reconstitute the lyophilized product in distilled water. Optimal concentration should be determined by the end user.
純化方法:affinity purified by Protein G
克隆類型:Monoclonal
克隆號：8D8
理論分子量：17 kDa
濃度：1mg/ml
儲存液：Size : 50ul/100ul/500ul0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.Size : 200ug (PBS only)0.01M PBS
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點背景
COX IV-1 核基因編碼復合體 IV 調(diào)節(jié)亞基，線粒體管家蛋白，多數(shù)細胞穩(wěn)定組成型表達，表達量幾乎不受凋亡、增殖影響。
線粒體蛋白專屬內(nèi)參對照，WB/IF 校正線粒體上樣量，區(qū)別于 GAPDH（胞質(zhì)內(nèi)參）、Histone（核內(nèi)參）。
單抗特異性不識別 COX IV-2 亞型，心肌、骨骼肌高豐度穩(wěn)定表達，適配線粒體分離樣本定量實驗。
核心實驗操作方法
1. Western Blot（WB）
抗體孵育
一抗孵育：用5%脫脂牛奶或BSA稀釋抗體至推薦濃度（如1:1000），4℃搖床緩慢孵育過夜；或室溫孵育1-2小時，孵育時保證膜完全浸沒在抗體溶液中。
洗滌：用TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘，洗去未結(jié)合的一抗；加入HRP標記二抗（1:5000-1:10000稀釋），室溫孵育1小時。
顯影：再次洗滌后，加入ECL發(fā)光液孵育1-2分鐘，用化學發(fā)光成像儀采集圖像，根據(jù)信號強度調(diào)整曝光時間。
2. 免疫組化（IHC）
抗體孵育
一抗孵育：滴加稀釋后的一抗（如1:200）于組織切片上，置于濕盒中4℃孵育過夜；次日室溫復溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入生物素標記二抗（1:200）室溫孵育30分鐘，PBS沖洗后加入ABC復合物（1:100）室溫孵育30分鐘。
顯色封片：DAB顯色劑顯色3-10分鐘（顯微鏡下觀察控制時間），蘇木素復染1分鐘，梯度乙醇脫水后中性樹膠封片。
3. 免疫熒光（IF）
抗體孵育
一抗孵育：用5% BSA稀釋抗體至工作濃度（如1:100），滴加在細胞爬片上，4℃避光孵育過夜；室溫復溫后PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入熒光標記二抗（如FITC標記抗兔IgG，1:200），室溫避光孵育30-60分鐘；PBS沖洗后用抗淬滅封片液封片。
觀察：熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察，激發(fā)波長根據(jù)二抗標記物選擇（如FITC為488nm）。
4. ELISA實驗
包被與孵育
包被：用包被緩沖液（pH9.6碳酸鹽緩沖液）稀釋抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃過夜孵育。
封閉與一抗孵育：棄去包被液，PBST洗滌3次，加入5% BSA封閉液200μl/孔，37℃孵育1小時；加入稀釋后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小時或4℃過夜。
檢測：洗滌后加入酶標二抗（1:5000），37℃孵育1小時；TMB底物溶液顯色10-30分鐘，2M硫酸終止反應后，酶標儀450nm波長讀取OD值。
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關(guān)鍵字： 細胞色素c氧化酶IV亞型1（內(nèi)參）單克隆;Mouse;17 kDa;
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