細胞色素P450 7A1抗體/膽固醇7a羥化酶抗體
原理特點
CYP7A1是膽汁酸合成的經(jīng)典途徑限速酶，催化膽固醇7α-羥化。它受膽汁酸的負反饋調(diào)控和晝夜節(jié)律調(diào)節(jié)。該抗體用于研究膽固醇代謝、膽汁酸穩(wěn)態(tài)和高脂血癥的發(fā)病機制。
英文名稱:CYP7A1 Rabbit pAb
中文名稱:細胞色素P450 7A1抗體/膽固醇7a羥化酶抗體
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英文別名:Cholesterol 7 alpha hydroxylase; Cholesterol 7 alpha monooxygenase; cholesterol 7 alpha-monooxygenase; Cholesterol 7-alpha-hydroxylase; Cholesterol 7-alpha-monooxygenase; CP7A; CYP 7; CYP7; CYPVII; Cytochrome P450 7A1; cytochrome P450, family 7, subfamily A, polypeptide 1; Cytochrome P450, subfamily VIIA(cholesterol 7 alpha monooxygenase); CP7A1_HUMAN.
交叉反應(yīng):Human,GuineaPig
抗體來源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human CYP7A1
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類型:Polyclonal
理論分子量：55 kDa
濃度：1mg/ml
儲存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點背景
肝臟膽汁酸合成限速酶，催化膽固醇生成 7α- 羥膽固醇，調(diào)控體內(nèi)膽固醇穩(wěn)態(tài)、脂質(zhì)吸收。
肥胖、高血脂、脂肪肝 CYP7A1 表達抑制，膽固醇堆積；FXR 通路負反饋抑制 CYP7A1 轉(zhuǎn)錄。
降脂、膽汁淤積疾病研究靶點，提升 CYP7A1 活性可降低血清膽固醇、改善肝脂沉積。
樣本處理與實驗操作
1. Western Blot（免疫印跡）
樣本制備
細胞樣本：PBS洗滌2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制劑），冰上裂解30分鐘，12000rpm離心15分鐘取上清，BCA法定量蛋白濃度
組織樣本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，離心后取上清，調(diào)整蛋白濃度至一致
變性處理：加入5×SDS上樣緩沖液，95℃加熱5-10分鐘，冷卻后上樣
抗體孵育
轉(zhuǎn)膜完成后，用5% BSA或牛奶封閉液室溫封閉1-2小時
一抗稀釋后4℃孵育過夜（12-16小時），或室溫孵育1-2小時；孵育時保證膜完全浸沒在抗體溶液中
TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘；加入二抗（1:5000-1:10000稀釋）室溫孵育1-2小時
再次洗滌后，用ECL發(fā)光液顯影，通過凝膠成像系統(tǒng)采集圖像
2. IHC-P（石蠟切片免疫組化）
樣本前處理
脫蠟水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分鐘）、無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分鐘），最后用PBS沖洗
抗原修復(fù)：將切片放入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，微波爐加熱至沸騰，保持10-15分鐘，自然冷卻至室溫
封閉處理：3% H?O?室溫孵育10分鐘滅活內(nèi)源性過氧化物酶，PBS沖洗后用10%山羊血清封閉30分鐘
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在切片上，4℃孵育過夜；孵育時置于濕盒中，防止液體揮發(fā)
次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入二抗（生物素標記）室溫孵育30分鐘
PBS沖洗后，加入ABC復(fù)合物室溫孵育30分鐘，DAB顯色劑顯色（顯微鏡下觀察控制時間，通常3-10分鐘），蘇木素復(fù)染后脫水封片
3. ICC/IF（細胞免疫熒光）
樣本制備
細胞爬片培養(yǎng)至70-80%匯合度，PBS洗滌2次，4%多聚甲醛固定15-20分鐘
通透處理（根據(jù)抗體類型選擇）：0.1% Triton X-100室溫孵育10分鐘，PBS沖洗3次
封閉處理：5% BSA室溫封閉30-60分鐘，減少非特異性結(jié)合
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在爬片上，4℃孵育過夜，或室溫孵育1-2小時
PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入熒光標記二抗（1:200-1:500稀釋），室溫避光孵育30-60分鐘
再次沖洗后，用抗淬滅封片液封片，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察采集圖像
4. ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）
包被與封閉
用包被緩沖液（如碳酸鹽緩沖液pH9.6）稀釋抗原至合適濃度，每孔加入100μl，4℃包被過夜
棄去包被液，PBST洗滌3次，每次3分鐘；加入封閉液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小時
抗體孵育
一抗按比例稀釋后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小時，或4℃孵育過夜
PBST洗滌3次，加入稀釋好的酶標二抗，每孔100μl，37℃孵育1小時
洗滌后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光顯色10-20分鐘，加入終止液（2M H?SO?），用酶標儀在450nm波長讀取OD值
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關(guān)鍵字： 細胞色素P450 7A1抗體/膽固醇7a;55 kDa;Rabbit;
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