產(chǎn)品屬性
產(chǎn)品名稱 | 中性粒細胞彈性蛋白酶ELANE抗體 | 貨號 | YS-K7806 |
英文名稱 | Neutrophil Elastase Rabbit pAb | 用途 | 僅供科研實驗 |
商品介紹
產(chǎn)品應用:
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:Bone Marrow Serine Protease; ELA 2; ELA2; ELANE; Elastase 2; Elastase-2; Elastase 2 neutrophil; Elastase neutrophil expressed; Elastase-2; ELNE_HUMAN; GE antibody Granulocyte derived elastase; HLE; HNE; Human leukocyte elastase; Leukocyte elastase; Leukocyte Elastase Precursor; Medullasin; NE; Neutrophil elastase; Neutrophill elastase; PMN E; PMN Elastase; Polymorphonuclear elastase; SCN1; Serine protease; SERP1.
交叉反應:Human
抗體來源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human Neutrophil Elastase/ELANE
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類型:Polyclonal
理論分子量：26 kDa
濃度：1mg/ml
儲存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
原理特點
靶向ELANE，是中性粒細胞嗜天青顆粒中的絲氨酸蛋白酶。它降解細菌外膜蛋白和細胞外基質(zhì)，在抗感染中發(fā)揮關鍵作用，但過度釋放導致組織損傷。該抗體用于研究炎癥、肺氣腫和骨髓異常增生。
靶點背景
靶點基礎定義與編碼基因：ELANE 基因編碼絲氨酸蛋白酶，儲存在中性粒細胞初級顆粒，炎癥釋放。
核心生理生物學功能：降解病原體、胞外基質(zhì)；參與中性粒細胞 NETs 形成、炎癥組織重塑。
疾病關聯(lián)與科研應用：膿毒癥、慢阻肺、類風濕關節(jié)炎、急性炎癥損傷；炎癥中性粒細胞活化特異性標志物。
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樣本處理與實驗操作
1. Western Blot（免疫印跡）
樣本制備
細胞樣本：PBS洗滌2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制劑），冰上裂解30分鐘，12000rpm離心15分鐘取上清，BCA法定量蛋白濃度
組織樣本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，離心后取上清，調(diào)整蛋白濃度至一致
變性處理：加入5×SDS上樣緩沖液，95℃加熱5-10分鐘，冷卻后上樣
抗體孵育
轉膜完成后，用5% BSA或牛奶封閉液室溫封閉1-2小時
一抗稀釋后4℃孵育過夜（12-16小時），或室溫孵育1-2小時；孵育時保證膜完全浸沒在抗體溶液中
TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘；加入二抗（1:5000-1:10000稀釋）室溫孵育1-2小時
再次洗滌后，用ECL發(fā)光液顯影，通過凝膠成像系統(tǒng)采集圖像
2. IHC-P（石蠟切片免疫組化）
樣本前處理
脫蠟水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分鐘）、無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分鐘），最后用PBS沖洗
抗原修復：將切片放入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，微波爐加熱至沸騰，保持10-15分鐘，自然冷卻至室溫
封閉處理：3% H?O?室溫孵育10分鐘滅活內(nèi)源性過氧化物酶，PBS沖洗后用10%山羊血清封閉30分鐘
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在切片上，4℃孵育過夜；孵育時置于濕盒中，防止液體揮發(fā)
次日室溫復溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入二抗（生物素標記）室溫孵育30分鐘
PBS沖洗后，加入ABC復合物室溫孵育30分鐘，DAB顯色劑顯色（顯微鏡下觀察控制時間，通常3-10分鐘），蘇木素復染后脫水封片
3. ICC/IF（細胞免疫熒光）
樣本制備
細胞爬片培養(yǎng)至70-80%匯合度，PBS洗滌2次，4%多聚甲醛固定15-20分鐘
通透處理（根據(jù)抗體類型選擇）：0.1% Triton X-100室溫孵育10分鐘，PBS沖洗3次
封閉處理：5% BSA室溫封閉30-60分鐘，減少非特異性結合
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在爬片上，4℃孵育過夜，或室溫孵育1-2小時
PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入熒光標記二抗（1:200-1:500稀釋），室溫避光孵育30-60分鐘
再次沖洗后，用抗淬滅封片液封片，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察采集圖像
4. ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）
包被與封閉
用包被緩沖液（如碳酸鹽緩沖液pH9.6）稀釋抗原至合適濃度，每孔加入100μl，4℃包被過夜
棄去包被液，PBST洗滌3次，每次3分鐘；加入封閉液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小時
抗體孵育
一抗按比例稀釋后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小時，或4℃孵育過夜
PBST洗滌3次，加入稀釋好的酶標二抗，每孔100μl，37℃孵育1小時
洗滌后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光顯色10-20分鐘，加入終止液（2M H?SO?），用酶標儀在450nm波長讀取OD值
關鍵字： 中性粒細胞彈性蛋白酶ELANE抗體;Rabbit;26 kDa;
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