原癌基因蛋白c-kit（CD117）抗體
原理特點
靶向c-Kit（CD117），是III型受體酪氨酸激酶，其配體為干細胞因子。它在造血干細胞、肥大細胞和Cajal間質(zhì)細胞上表達，調(diào)控細胞存活、增殖和分化。c-Kit功能獲得性突變導致胃腸道間質(zhì)瘤和肥大細胞增多癥。該抗體用于GIST診斷和伊馬替尼靶向治療指導。
英文名稱:c-Kit Rabbit pAb
中文名稱:原癌基因蛋白c-kit（CD117）抗體
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:C Kit; CD 117; CD117; CD117 antigen; KIT; KIT_HUMAN; Mast/stem cell growth factor receptor; Mast/stem cell growth factor receptor Kit; p145 c-kit; PBT; Piebald trait protein; Proto oncogene c Kit; Proto oncogene tyrosine protein kinase Kit; Proto-oncogene c-Kit; SCF Receptor; SCFR; soluble KIT variant 1; Stem cell factor receptor; tyrosine protein kinase Kit; Tyrosine-protein kinase Kit; v kit Hardy Zuckerman 4 feline sarcoma viral oncogene homolog; v kit Hardy Zuckerman 4 feline sarcoma viral oncogene like protein; v-kit Hardy-Zuckerman 4 feline sarcoma viral oncogene homolog.
交叉反應:Human,Mouse,Rat
抗體來源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human CD117
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類型:Polyclonal
理論分子量：105 kDa
濃度：1mg/ml
儲存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點背景
c-kit 是 Ⅲ 型受體酪氨酸激酶原癌基因，配體為 SCF 干細胞因子，正常調(diào)控造血、肥大細胞、生殖細胞、黑色素細胞發(fā)育。
基因點突變、外顯子缺失突變導致受體無需配體持續(xù)自激活，驅(qū)動胃腸道間質(zhì)瘤 GIST、肥大細胞白血病、黑色素瘤發(fā)病。
CD117 免疫組化是 GIST 病理確診金標準標志物，陽性病例可使用伊馬替尼等 c-kit 靶向抑制劑；抗體廣泛用于病理診斷分型。
核心實驗操作方法
1. Western Blot（WB）
抗體孵育
一抗孵育：用5%脫脂牛奶或BSA稀釋抗體至推薦濃度（如1:1000），4℃搖床緩慢孵育過夜；或室溫孵育1-2小時，孵育時保證膜完全浸沒在抗體溶液中。
洗滌：用TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘，洗去未結(jié)合的一抗；加入HRP標記二抗（1:5000-1:10000稀釋），室溫孵育1小時。
顯影：再次洗滌后，加入ECL發(fā)光液孵育1-2分鐘，用化學發(fā)光成像儀采集圖像，根據(jù)信號強度調(diào)整曝光時間。
2. 免疫組化（IHC）
抗體孵育
一抗孵育：滴加稀釋后的一抗（如1:200）于組織切片上，置于濕盒中4℃孵育過夜；次日室溫復溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入生物素標記二抗（1:200）室溫孵育30分鐘，PBS沖洗后加入ABC復合物（1:100）室溫孵育30分鐘。
顯色封片：DAB顯色劑顯色3-10分鐘（顯微鏡下觀察控制時間），蘇木素復染1分鐘，梯度乙醇脫水后中性樹膠封片。
3. 免疫熒光（IF）
抗體孵育
一抗孵育：用5% BSA稀釋抗體至工作濃度（如1:100），滴加在細胞爬片上，4℃避光孵育過夜；室溫復溫后PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入熒光標記二抗（如FITC標記抗兔IgG，1:200），室溫避光孵育30-60分鐘；PBS沖洗后用抗淬滅封片液封片。
觀察：熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察，激發(fā)波長根據(jù)二抗標記物選擇（如FITC為488nm）。
4. ELISA實驗
包被與孵育
包被：用包被緩沖液（pH9.6碳酸鹽緩沖液）稀釋抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃過夜孵育。
封閉與一抗孵育：棄去包被液，PBST洗滌3次，加入5% BSA封閉液200μl/孔，37℃孵育1小時；加入稀釋后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小時或4℃過夜。
檢測：洗滌后加入酶標二抗（1:5000），37℃孵育1小時；TMB底物溶液顯色10-30分鐘，2M硫酸終止反應后，酶標儀450nm波長讀取OD值。
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關鍵字： 原癌基因蛋白c-kit（CD117）抗體;105 kDa;Rabbit;
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