原癌基因蛋白c-kit（CD117）抗體
原理特點(diǎn)
靶向c-Kit（CD117），是III型受體酪氨酸激酶，其配體為干細(xì)胞因子。它在造血干細(xì)胞、肥大細(xì)胞和Cajal間質(zhì)細(xì)胞上表達(dá)，調(diào)控細(xì)胞存活、增殖和分化。c-Kit功能獲得性突變導(dǎo)致胃腸道間質(zhì)瘤和肥大細(xì)胞增多癥。該抗體用于GIST診斷和伊馬替尼靶向治療指導(dǎo)。
英文名稱:c-Kit Rabbit pAb
中文名稱:原癌基因蛋白c-kit（CD117）抗體
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:C Kit; CD 117; CD117; CD117 antigen; KIT; KIT_HUMAN; Mast/stem cell growth factor receptor; Mast/stem cell growth factor receptor Kit; p145 c-kit; PBT; Piebald trait protein; Proto oncogene c Kit; Proto oncogene tyrosine protein kinase Kit; Proto-oncogene c-Kit; SCF Receptor; SCFR; soluble KIT variant 1; Stem cell factor receptor; tyrosine protein kinase Kit; Tyrosine-protein kinase Kit; v kit Hardy Zuckerman 4 feline sarcoma viral oncogene homolog; v kit Hardy Zuckerman 4 feline sarcoma viral oncogene like protein; v-kit Hardy-Zuckerman 4 feline sarcoma viral oncogene homolog.
交叉反應(yīng):Human,Mouse,Rat
抗體來源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human CD117
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類型:Polyclonal
理論分子量：105 kDa
濃度：1mg/ml
儲(chǔ)存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項(xiàng)：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點(diǎn)背景
c-kit 是 Ⅲ 型受體酪氨酸激酶原癌基因，配體為 SCF 干細(xì)胞因子，正常調(diào)控造血、肥大細(xì)胞、生殖細(xì)胞、黑色素細(xì)胞發(fā)育。
基因點(diǎn)突變、外顯子缺失突變導(dǎo)致受體無需配體持續(xù)自激活，驅(qū)動(dòng)胃腸道間質(zhì)瘤 GIST、肥大細(xì)胞白血病、黑色素瘤發(fā)病。
CD117 免疫組化是 GIST 病理確診金標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)志物，陽性病例可使用伊馬替尼等 c-kit 靶向抑制劑；抗體廣泛用于病理診斷分型。
核心實(shí)驗(yàn)操作方法
1. Western Blot（WB）
抗體孵育
一抗孵育：用5%脫脂牛奶或BSA稀釋抗體至推薦濃度（如1:1000），4℃搖床緩慢孵育過夜；或室溫孵育1-2小時(shí)，孵育時(shí)保證膜完全浸沒在抗體溶液中。
洗滌：用TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘，洗去未結(jié)合的一抗；加入HRP標(biāo)記二抗（1:5000-1:10000稀釋），室溫孵育1小時(shí)。
顯影：再次洗滌后，加入ECL發(fā)光液孵育1-2分鐘，用化學(xué)發(fā)光成像儀采集圖像，根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度調(diào)整曝光時(shí)間。
2. 免疫組化（IHC）
抗體孵育
一抗孵育：滴加稀釋后的一抗（如1:200）于組織切片上，置于濕盒中4℃孵育過夜；次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入生物素標(biāo)記二抗（1:200）室溫孵育30分鐘，PBS沖洗后加入ABC復(fù)合物（1:100）室溫孵育30分鐘。
顯色封片：DAB顯色劑顯色3-10分鐘（顯微鏡下觀察控制時(shí)間），蘇木素復(fù)染1分鐘，梯度乙醇脫水后中性樹膠封片。
3. 免疫熒光（IF）
抗體孵育
一抗孵育：用5% BSA稀釋抗體至工作濃度（如1:100），滴加在細(xì)胞爬片上，4℃避光孵育過夜；室溫復(fù)溫后PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入熒光標(biāo)記二抗（如FITC標(biāo)記抗兔IgG，1:200），室溫避光孵育30-60分鐘；PBS沖洗后用抗淬滅封片液封片。
觀察：熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察，激發(fā)波長根據(jù)二抗標(biāo)記物選擇（如FITC為488nm）。
4. ELISA實(shí)驗(yàn)
包被與孵育
包被：用包被緩沖液（pH9.6碳酸鹽緩沖液）稀釋抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃過夜孵育。
封閉與一抗孵育：棄去包被液，PBST洗滌3次，加入5% BSA封閉液200μl/孔，37℃孵育1小時(shí)；加入稀釋后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小時(shí)或4℃過夜。
檢測(cè)：洗滌后加入酶標(biāo)二抗（1:5000），37℃孵育1小時(shí)；TMB底物溶液顯色10-30分鐘，2M硫酸終止反應(yīng)后，酶標(biāo)儀450nm波長讀取OD值。
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關(guān)鍵字： 原癌基因蛋白c-kit（CD117）抗體;105 kDa;Rabbit;
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