產(chǎn)品屬性

商品介紹

產(chǎn)品應(yīng)用:

Not yet tested in other applications.

Optimal working dilutions must be determined by the end user.

英文別名:LASS2; TMSG-1; CerS 2; CerS2; L3 antibody LAG1 homolog ceramide synthase 2; LAG1 longevity assurance 2; LAG1 longevity assurance homolog 2; LASS 2; Longevity assurance(LAG1 S. cerevisiae) homolog 2; TMSG 1; TMSG1; Tumor metastasis suppressor; Tumor metastasis suppressor gene 1 protein; FLJ10243; MGC987; SP 260; SP260.

交叉反應(yīng):Rat

抗體來源:Rabbit

免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human LASS2

亞型:IgG

性狀:Liquid

純化方法:affinity purified by Protein A

克隆類型:Polyclonal

理論分子量：45 kDa

濃度：1mg/ml

儲(chǔ)存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

注意事項(xiàng)：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

原理特點(diǎn)

靶向NM23/NME1，是核苷二磷酸激酶家族成員。它催化NDP磷酸化生成NTP，調(diào)控細(xì)胞骨架和信號(hào)傳導(dǎo)，其低表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移潛能增加相關(guān)。該抗體用于研究腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制。

靶點(diǎn)背景

靶點(diǎn)基礎(chǔ)定義與編碼基因：NME1（NM23-H1）首個(gè)被發(fā)現(xiàn)廣譜轉(zhuǎn)移抑制基因，核苷二磷酸激酶活性。

核心生理生物學(xué)功能：調(diào)控微管組裝、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、DNA 修復(fù)、c-Myc 轉(zhuǎn)錄抑制；降低腫瘤遷移侵襲能力。

疾病關(guān)聯(lián)與科研應(yīng)用：乳腺癌、黑色素瘤、肝癌轉(zhuǎn)移預(yù)后標(biāo)志物；腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移潛能分層、轉(zhuǎn)移抑制通路驗(yàn)證。

公司正在出售的產(chǎn)品

樣本處理與實(shí)驗(yàn)操作

1. Western Blot（免疫印跡）

樣本制備

細(xì)胞樣本：PBS洗滌2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制劑），冰上裂解30分鐘，12000rpm離心15分鐘取上清，BCA法定量蛋白濃度

組織樣本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，離心后取上清，調(diào)整蛋白濃度至一致

變性處理：加入5×SDS上樣緩沖液，95℃加熱5-10分鐘，冷卻后上樣

抗體孵育

轉(zhuǎn)膜完成后，用5% BSA或牛奶封閉液室溫封閉1-2小時(shí)

一抗稀釋后4℃孵育過夜（12-16小時(shí)），或室溫孵育1-2小時(shí)；孵育時(shí)保證膜完全浸沒在抗體溶液中

TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘；加入二抗（1:5000-1:10000稀釋）室溫孵育1-2小時(shí)

再次洗滌后，用ECL發(fā)光液顯影，通過凝膠成像系統(tǒng)采集圖像

2. IHC-P（石蠟切片免疫組化）

樣本前處理

脫蠟水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分鐘）、無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分鐘），最后用PBS沖洗

抗原修復(fù)：將切片放入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，微波爐加熱至沸騰，保持10-15分鐘，自然冷卻至室溫

封閉處理：3% H?O?室溫孵育10分鐘滅活內(nèi)源性過氧化物酶，PBS沖洗后用10%山羊血清封閉30分鐘

抗體孵育

一抗稀釋后滴加在切片上，4℃孵育過夜；孵育時(shí)置于濕盒中，防止液體揮發(fā)

次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入二抗（生物素標(biāo)記）室溫孵育30分鐘

PBS沖洗后，加入ABC復(fù)合物室溫孵育30分鐘，DAB顯色劑顯色（顯微鏡下觀察控制時(shí)間，通常3-10分鐘），蘇木素復(fù)染后脫水封片

3. ICC/IF（細(xì)胞免疫熒光）

樣本制備

細(xì)胞爬片培養(yǎng)至70-80%匯合度，PBS洗滌2次，4%多聚甲醛固定15-20分鐘

通透處理（根據(jù)抗體類型選擇）：0.1% Triton X-100室溫孵育10分鐘，PBS沖洗3次

封閉處理：5% BSA室溫封閉30-60分鐘，減少非特異性結(jié)合

抗體孵育

一抗稀釋后滴加在爬片上，4℃孵育過夜，或室溫孵育1-2小時(shí)

PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入熒光標(biāo)記二抗（1:200-1:500稀釋），室溫避光孵育30-60分鐘

再次沖洗后，用抗淬滅封片液封片，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察采集圖像

4. ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）

包被與封閉

用包被緩沖液（如碳酸鹽緩沖液pH9.6）稀釋抗原至合適濃度，每孔加入100μl，4℃包被過夜

棄去包被液，PBST洗滌3次，每次3分鐘；加入封閉液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小時(shí)

抗體孵育

一抗按比例稀釋后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小時(shí)，或4℃孵育過夜

PBST洗滌3次，加入稀釋好的酶標(biāo)二抗，每孔100μl，37℃孵育1小時(shí)

洗滌后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光顯色10-20分鐘，加入終止液（2M H?SO?），用酶標(biāo)儀在450nm波長讀取OD值