早期內(nèi)吞體相關(guān)蛋白1抗體
原理特點(diǎn)
靶向EEA1，是早期內(nèi)吞體的標(biāo)志蛋白。它通過FYVE結(jié)構(gòu)域結(jié)合PI3P，錨定在內(nèi)吞體膜上，介導(dǎo)內(nèi)吞小泡的栓系和融合。該抗體用于研究?jī)?nèi)吞途徑、膜運(yùn)輸和受體信號(hào)調(diào)控。
英文名稱:EEA1 Rabbit pAb
中文名稱:早期內(nèi)吞體相關(guān)蛋白1抗體
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:Early endosome antigen 1; Early endosome antigen 1, 162kD; Early endosome associated protein; EEA 1; EEA1; EEA1_HUMAN; Endosome associated protein p162; Endosome-associated protein p162; MST105; MSTP105; ZFYVE2; Zinc finger FYVE domain containing protein 2; Zinc finger FYVE domain-containing protein 2.
交叉反應(yīng):Human,Hamster
抗體來源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human EEA1
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類型:Polyclonal
理論分子量：162 kDa
濃度：1mg/ml
儲(chǔ)存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項(xiàng)：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點(diǎn)背景
EEA1 是早期內(nèi)吞體標(biāo)志性支架蛋白，結(jié)合 Rab5-GTP 錨定膜結(jié)構(gòu)，調(diào)控胞吞物質(zhì)分選、早期內(nèi)吞體融合成熟。
介導(dǎo)生長(zhǎng)因子受體、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、病毒顆粒胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)；腫瘤細(xì)胞上調(diào) EEA1 增強(qiáng)受體循環(huán)，放大 EGFR、整合素促轉(zhuǎn)移信號(hào)。
經(jīng)典早期內(nèi)吞體熒光標(biāo)記物，免疫熒光可清晰標(biāo)記早期胞吞囊泡，用于胞吞、膜轉(zhuǎn)運(yùn)、病毒入侵機(jī)制實(shí)驗(yàn)。
核心實(shí)驗(yàn)操作方法
1. Western Blot（WB）
抗體孵育
一抗孵育：用5%脫脂牛奶或BSA稀釋抗體至推薦濃度（如1:1000），4℃搖床緩慢孵育過夜；或室溫孵育1-2小時(shí)，孵育時(shí)保證膜完全浸沒在抗體溶液中。
洗滌：用TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘，洗去未結(jié)合的一抗；加入HRP標(biāo)記二抗（1:5000-1:10000稀釋），室溫孵育1小時(shí)。
顯影：再次洗滌后，加入ECL發(fā)光液孵育1-2分鐘，用化學(xué)發(fā)光成像儀采集圖像，根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度調(diào)整曝光時(shí)間。
2. 免疫組化（IHC）
抗體孵育
一抗孵育：滴加稀釋后的一抗（如1:200）于組織切片上，置于濕盒中4℃孵育過夜；次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入生物素標(biāo)記二抗（1:200）室溫孵育30分鐘，PBS沖洗后加入ABC復(fù)合物（1:100）室溫孵育30分鐘。
顯色封片：DAB顯色劑顯色3-10分鐘（顯微鏡下觀察控制時(shí)間），蘇木素復(fù)染1分鐘，梯度乙醇脫水后中性樹膠封片。
3. 免疫熒光（IF）
抗體孵育
一抗孵育：用5% BSA稀釋抗體至工作濃度（如1:100），滴加在細(xì)胞爬片上，4℃避光孵育過夜；室溫復(fù)溫后PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入熒光標(biāo)記二抗（如FITC標(biāo)記抗兔IgG，1:200），室溫避光孵育30-60分鐘；PBS沖洗后用抗淬滅封片液封片。
觀察：熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察，激發(fā)波長(zhǎng)根據(jù)二抗標(biāo)記物選擇（如FITC為488nm）。
4. ELISA實(shí)驗(yàn)
包被與孵育
包被：用包被緩沖液（pH9.6碳酸鹽緩沖液）稀釋抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃過夜孵育。
封閉與一抗孵育：棄去包被液，PBST洗滌3次，加入5% BSA封閉液200μl/孔，37℃孵育1小時(shí)；加入稀釋后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小時(shí)或4℃過夜。
檢測(cè)：洗滌后加入酶標(biāo)二抗（1:5000），37℃孵育1小時(shí)；TMB底物溶液顯色10-30分鐘，2M硫酸終止反應(yīng)后，酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)讀取OD值。
公司正在出售的產(chǎn)品
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關(guān)鍵字： 早期內(nèi)吞體相關(guān)蛋白1抗體;162 kDa;Rabbit;
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