原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系
產(chǎn)品信息:
培養(yǎng)基成分
產(chǎn)品形態(tài) 液體
細(xì)菌檢測 陰性
真菌檢測 陰性
支原體檢測 陰性
產(chǎn)品濃度 1×
原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系是一個為體外生長的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳動物的成纖維細(xì)胞設(shè)計的理想的完全培養(yǎng)基方案。本體系是一個基于碳酸氫鹽的緩沖體系,可以在孵育的5%的CO2的氣體環(huán)境下維持一個圍繞pH7.2的酸堿緩沖體系。本體系是一個無菌的液體混合系統(tǒng),其中包含必須和非必須氨基酸、維生素、激素、生長因子、微量元素和一些其他的有機和無機化合物以及胎牛血清(10%)。本培養(yǎng)體系是基于固定配方配制的液態(tài)培養(yǎng)體系,可以為體外培養(yǎng)的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳動物的成纖維細(xì)胞提供一個確定適宜的平衡營養(yǎng)環(huán)境,并且可以選擇性的
產(chǎn)品規(guī)格 125mL×4
pH 7.4-7.8
細(xì)胞生長實驗 細(xì)胞生長良好,形態(tài)正常
內(nèi)毒素含量 < 3 EU/mL
儲存條件 2-8℃,避光儲存
運輸條件 冰袋運輸
有效期 6個月
操作步驟:
1. 細(xì)胞接收處理
?凍存細(xì)胞?:干冰運輸?shù)截浐?,立即轉(zhuǎn)入液氮儲存,或24小時內(nèi)放至-80℃冰箱暫存,再盡快復(fù)蘇。
?活細(xì)胞(T25瓶)?:75%酒精消毒瓶身,放入培養(yǎng)箱靜置2小時,鏡檢觀察匯合度:達到80%以上即可傳代,不足則更換新鮮培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)。
2. 細(xì)胞復(fù)蘇
1、提前將完全培養(yǎng)基放入37℃水浴預(yù)熱;從液氮取出凍存管,暫時放-80℃讓殘余液氮揮發(fā)。
2、用鑷子夾住凍存管,放入37℃水浴快速晃動,1分鐘左右完全融化(注意不要沒過管口)。
3、酒精消毒凍存管外壁,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含6-7mL完全培養(yǎng)基的離心管,1100rpm室溫離心4分鐘。
4、棄上清,用1mL新鮮完全培養(yǎng)基重懸,轉(zhuǎn)移至含4mL培養(yǎng)基的T25培養(yǎng)瓶,做好標(biāo)記后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
常見的基礎(chǔ)培養(yǎng)基類型:
根據(jù)細(xì)胞類型的不同,實驗室常選用不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基:
DMEM(Dulbecco改良型Eagle培養(yǎng)基):應(yīng)用最廣的廣譜貼壁細(xì)胞培養(yǎng)基,有高糖和低糖配方可選,適用于成纖維細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等。
RPMI 1640:專為懸浮細(xì)胞設(shè)計,含有豐富的氨基酸和維生素,是淋巴細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞及免疫學(xué)研究的首選。
MEM(最低必需培養(yǎng)基):成分精簡的基礎(chǔ)通用型培養(yǎng)基,成本低,適合常規(guī)貼壁細(xì)胞系。
DMEM/F12:結(jié)合了DMEM的高營養(yǎng)和F12的成分多樣性,非常適合原代細(xì)胞、難養(yǎng)細(xì)胞株以及低血清/無血清培養(yǎng)。
IMDM:高度富集的營養(yǎng)強化型培養(yǎng)基,適用于對營養(yǎng)要求苛刻的造血細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等高密度快速增殖細(xì)胞。
特殊功能培養(yǎng)基:如Neurobasal(神經(jīng)元專用)、Essential 8?(人多能干細(xì)胞無異種無飼養(yǎng)層培養(yǎng))等,針對特定細(xì)胞具有極高的專一性。
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細(xì)胞培養(yǎng)注意事項:
無菌操作與污染防范
嚴(yán)防支原體污染:支原體被稱為“最安靜的實驗殺手”,通常不會引起培養(yǎng)基渾濁或明顯改變細(xì)胞形態(tài),但會嚴(yán)重干擾細(xì)胞代謝與基因表達。建議將PCR檢測法作為日常篩查的常規(guī)手段。
規(guī)范抗生素使用:除特殊篩選系統(tǒng)外,正常培養(yǎng)狀態(tài)下不建議添加任何抗生素。若確需防止細(xì)菌污染,可加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液(終濃度為青霉素100 U/mL,鏈霉素100 μg/mL)。
杜絕交叉污染:預(yù)熱后未用完的培養(yǎng)基絕對不可倒回原瓶;分裝時避免瓶口接觸容器內(nèi)壁,操作完畢后立即密封。所有廢棄培養(yǎng)基必須經(jīng)高壓滅菌后方可處理。
關(guān)鍵字: 原代成纖維;細(xì)胞培養(yǎng)體系;
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