產(chǎn)品屬性
產(chǎn)品名稱 | PerCP-Cy5.5標(biāo)記的S100鈣結(jié)合蛋白A6重組兔單抗 | 貨號 | YS-K9432 |
英文名稱 | S100A6 Recombinant Rabbit mAb, PerCP-Cy5.5 conjugated | 用途 | 僅供科研實驗 |
商品介紹
英文別名：Protein S100-A6; Calcyclin; MLN 4; PRA; CACY; CABP; 5B10.
靶蛋白：S100A6（鈣結(jié)合蛋白家族）
抗體類型：重組兔單克隆抗體
熒光標(biāo)記：PerCP-Cy5.5（激發(fā) 488nm，發(fā)射 695nm 遠(yuǎn)紅光，多色流式常用串聯(lián)染料）
靶蛋白功能
鈣信號調(diào)控蛋白，參與細(xì)胞增殖、凋亡、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、纖維化、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移，在成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞高表達。
適用實驗
多色流式 FCM、IF、IHC、胞內(nèi)蛋白共定位
適用物種：人、小鼠、大鼠
原理特點
該重組兔單抗搭配PerCP-Cy5.5串聯(lián)遠(yuǎn)紅外熒光標(biāo)記，抗淬滅、低背景、多色適配性極佳，特異性識別S100A6鈣結(jié)合蛋白。S100A6通過結(jié)合鈣離子調(diào)控細(xì)胞增殖、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、纖維化及腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移，在腫瘤與纖維化組織中高表達。該抗體特異性強、信號穩(wěn)定，適合多色流式聯(lián)合染色、免疫熒光共定位分析，可精準(zhǔn)檢測組織與細(xì)胞中S100A6的表達差異。
靶點背景
1. S100A6 屬于鈣感應(yīng)蛋白家族，鈣離子結(jié)合后構(gòu)象改變調(diào)控下游靶分子
2. 參與細(xì)胞增殖、凋亡、細(xì)胞骨架重塑、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、應(yīng)激應(yīng)答
3. 腫瘤增殖侵襲、纖維化疾病、細(xì)胞衰老相關(guān)病理研究標(biāo)志物
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樣本處理與實驗操作
1. Western Blot（免疫印跡）
樣本制備
細(xì)胞樣本：PBS洗滌2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制劑），冰上裂解30分鐘，12000rpm離心15分鐘取上清，BCA法定量蛋白濃度
組織樣本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，離心后取上清，調(diào)整蛋白濃度至一致
變性處理：加入5×SDS上樣緩沖液，95℃加熱5-10分鐘，冷卻后上樣
抗體孵育
轉(zhuǎn)膜完成后，用5% BSA或牛奶封閉液室溫封閉1-2小時
一抗稀釋后4℃孵育過夜（12-16小時），或室溫孵育1-2小時；孵育時保證膜完全浸沒在抗體溶液中
TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘；加入二抗（1:5000-1:10000稀釋）室溫孵育1-2小時
再次洗滌后，用ECL發(fā)光液顯影，通過凝膠成像系統(tǒng)采集圖像
2. IHC-P（石蠟切片免疫組化）
樣本前處理
脫蠟水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分鐘）、無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分鐘），最后用PBS沖洗
抗原修復(fù)：將切片放入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，微波爐加熱至沸騰，保持10-15分鐘，自然冷卻至室溫
封閉處理：3% H?O?室溫孵育10分鐘滅活內(nèi)源性過氧化物酶，PBS沖洗后用10%山羊血清封閉30分鐘
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在切片上，4℃孵育過夜；孵育時置于濕盒中，防止液體揮發(fā)
次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入二抗（生物素標(biāo)記）室溫孵育30分鐘
PBS沖洗后，加入ABC復(fù)合物室溫孵育30分鐘，DAB顯色劑顯色（顯微鏡下觀察控制時間，通常3-10分鐘），蘇木素復(fù)染后脫水封片
3. ICC/IF（細(xì)胞免疫熒光）
樣本制備
細(xì)胞爬片培養(yǎng)至70-80%匯合度，PBS洗滌2次，4%多聚甲醛固定15-20分鐘
通透處理（根據(jù)抗體類型選擇）：0.1% Triton X-100室溫孵育10分鐘，PBS沖洗3次
封閉處理：5% BSA室溫封閉30-60分鐘，減少非特異性結(jié)合
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在爬片上，4℃孵育過夜，或室溫孵育1-2小時
PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入熒光標(biāo)記二抗（1:200-1:500稀釋），室溫避光孵育30-60分鐘
再次沖洗后，用抗淬滅封片液封片，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察采集圖像
4. ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）
包被與封閉
用包被緩沖液（如碳酸鹽緩沖液pH9.6）稀釋抗原至合適濃度，每孔加入100μl，4℃包被過夜
棄去包被液，PBST洗滌3次，每次3分鐘；加入封閉液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小時
抗體孵育
一抗按比例稀釋后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小時，或4℃孵育過夜
PBST洗滌3次，加入稀釋好的酶標(biāo)二抗，每孔100μl，37℃孵育1小時
洗滌后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光顯色10-20分鐘，加入終止液（2M H?SO?），用酶標(biāo)儀在450nm波長讀取OD值
關(guān)鍵字： PerCP-Cy5.5標(biāo)記的S100鈣結(jié);S100A6 Recombinant R;100ul;
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