產(chǎn)品屬性
產(chǎn)品名稱 | IRDye 800CW標(biāo)記的緊密連接蛋白1重組小鼠單抗 | 貨號(hào) | YS-K9630 |
英文名稱 | CLDN1 Recombinant Mouse mAb, IRDye 800CW conjugated | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
商品介紹
英文別名：CLD1; ILVASC; SEMP1; CLD1_HUMAN; CLDN1; Senescence-associated epithelial membrane protein;
基礎(chǔ)屬性
靶蛋白：ZO-1（緊密連接蛋白 1）
抗體類型：重組小鼠單克隆抗體
熒光標(biāo)記：IRDye 800CW（近紅外熒光，激發(fā) 778nm，發(fā)射 794nm，雙色紅外 WB 標(biāo)配）
靶蛋白功能
上皮 / 內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接核心支架蛋白，維持細(xì)胞屏障完整性；屏障損傷、炎癥、血管滲漏、腫瘤侵襲評(píng)價(jià)指標(biāo)。
適用實(shí)驗(yàn)
近紅外雙色 Western Blot、組織熒光成像、IF、IHC
適用物種：人、小鼠、大鼠
原理特點(diǎn)
該重組小鼠單抗偶聯(lián)IRDye 800CW近紅外熒光染料，特異性識(shí)別緊密連接蛋白ZO-1，ZO-1是上皮、內(nèi)皮細(xì)胞屏障的核心支架蛋白，維持細(xì)胞緊密連接完整性，調(diào)控組織屏障通透性與細(xì)胞極性。近紅外熒光背景極低、穿透力強(qiáng)，適合活體組織成像、近紅外WB檢測(cè)、高靈敏度免疫熒光染色，可精準(zhǔn)評(píng)價(jià)細(xì)胞屏障損傷與重塑狀態(tài)，廣泛用于炎癥屏障損傷、腫瘤侵襲研究。
靶點(diǎn)背景
1. ZO-1 是緊密連接支架蛋白，定位于上皮、內(nèi)皮細(xì)胞間連接復(fù)合體部位
2. 交聯(lián)跨膜緊密連接蛋白，維持細(xì)胞屏障完整性、調(diào)控細(xì)胞旁通透性
3. 血腦屏障、腸道屏障、血管內(nèi)皮屏障損傷、上皮通透性檢測(cè)標(biāo)志物
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核心實(shí)驗(yàn)操作方法
1. Western Blot（WB）
抗體孵育
一抗孵育：用5%脫脂牛奶或BSA稀釋抗體至推薦濃度（如1:1000），4℃搖床緩慢孵育過(guò)夜；或室溫孵育1-2小時(shí)，孵育時(shí)保證膜完全浸沒在抗體溶液中。
洗滌：用TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘，洗去未結(jié)合的一抗；加入HRP標(biāo)記二抗（1:5000-1:10000稀釋），室溫孵育1小時(shí)。
顯影：再次洗滌后，加入ECL發(fā)光液孵育1-2分鐘，用化學(xué)發(fā)光成像儀采集圖像，根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度調(diào)整曝光時(shí)間。
2. 免疫組化（IHC）
抗體孵育
一抗孵育：滴加稀釋后的一抗（如1:200）于組織切片上，置于濕盒中4℃孵育過(guò)夜；次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入生物素標(biāo)記二抗（1:200）室溫孵育30分鐘，PBS沖洗后加入ABC復(fù)合物（1:100）室溫孵育30分鐘。
顯色封片：DAB顯色劑顯色3-10分鐘（顯微鏡下觀察控制時(shí)間），蘇木素復(fù)染1分鐘，梯度乙醇脫水后中性樹膠封片。
3. 免疫熒光（IF）
抗體孵育
一抗孵育：用5% BSA稀釋抗體至工作濃度（如1:100），滴加在細(xì)胞爬片上，4℃避光孵育過(guò)夜；室溫復(fù)溫后PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入熒光標(biāo)記二抗（如FITC標(biāo)記抗兔IgG，1:200），室溫避光孵育30-60分鐘；PBS沖洗后用抗淬滅封片液封片。
觀察：熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察，激發(fā)波長(zhǎng)根據(jù)二抗標(biāo)記物選擇（如FITC為488nm）。
4. ELISA實(shí)驗(yàn)
包被與孵育
包被：用包被緩沖液（pH9.6碳酸鹽緩沖液）稀釋抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃過(guò)夜孵育。
封閉與一抗孵育：棄去包被液，PBST洗滌3次，加入5% BSA封閉液200μl/孔，37℃孵育1小時(shí)；加入稀釋后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小時(shí)或4℃過(guò)夜。
檢測(cè)：洗滌后加入酶標(biāo)二抗（1:5000），37℃孵育1小時(shí)；TMB底物溶液顯色10-30分鐘，2M硫酸終止反應(yīng)后，酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)讀取OD值。
關(guān)鍵字： IRDye 800CW標(biāo)記的緊密連接蛋白;CLDN1 Recombinant Mo;100ul;
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