BF647標記的微管蛋白α/Tubulin α/α-tubulin單克隆抗體
原理特點
該單克隆抗體經(jīng)BF647遠紅光標記，特異性識別α微管蛋白，α-tubulin是細胞骨架微管的核心組成亞基，參與細胞形態(tài)維持、細胞分裂、物質(zhì)運輸、細胞遷移等生命活動，是細胞實驗中常用的內(nèi)參蛋白。該抗體結合活性強、特異性極高，無其他骨架蛋白交叉反應，BF647熒光抗干擾能力強，可用于免疫熒光細胞骨架染色、蛋白表達內(nèi)參校準、細胞形態(tài)與骨架重構機制研究。
英文名稱:alpha Tubulin Mouse mAb, BF647 conjugated
中文名稱:BF647標記的微管蛋白α/Tubulin α/α-tubulin單克隆抗體
英文別名：alpha tubulin 1; alpha-tubulin 1; Detyrosinated alpha Tubulin; FLJ30169; H2 alpha; TBA4A_HUMAN; Testis specific alpha tubulin; Testis-specific alpha-tubulin; TUBA 4A; TUBA1; Tuba4a; Tubulin alpha 1(testis specific); Tubulin alpha 1; Tubulin alpha 1 chain; Tubulin alpha 4a; Tubulin alpha 4A chain; Tubulin alpha-1 chain; Tubulin alpha-4A chain; Tubulin H2 alpha; Tubulin H2-alpha; TUBA4A; α-tubulin; α tubulin; Tubulin-alpha.
AF647熒光光譜
靶標：α-Tubulin α 微管蛋白，細胞骨架核心蛋白，通用內(nèi)參蛋白
熒光標記：BF647（對標 AF647）；Ex=647 nm，Em=666 nm，近紅外低背景
抗體類型：鼠 / 兔單克隆（經(jīng)典克隆 TU-01、11H10）
種屬反應：人、小鼠、大鼠、斑馬魚、果蠅、多種哺乳動物廣譜反應
適用實驗：免疫熒光骨架染色、流式、WB 內(nèi)參、共聚焦多色共染
功能用途：細胞形態(tài)、有絲分裂、細胞骨架組裝、藥物骨架毒性研究
靶點背景
1. α- 微管蛋白是構成微管細胞骨架核心亞基，與 β-tubulin 組裝微管結構
2. 維持細胞形態(tài)、紡錘體組裝、胞內(nèi)物質(zhì)運輸、細胞分裂進程調(diào)控
3. WB 內(nèi)參蛋白、免疫熒光細胞骨架定位、細胞形態(tài)學對照常用指標
樣本處理標準流程
1. 細胞樣本制備
洗滌：用預冷PBS輕貼細胞表面洗滌2-3次，避免用力沖洗導致細胞脫落。
固定與通透：4℃預冷的4%多聚甲醛固定15-20分鐘；如需檢測胞內(nèi)蛋白，用0.1-0.3% Triton X-100室溫通透10-15分鐘。
封閉：用5% BSA或10%胎牛血清室溫封閉30-60分鐘，減少非特異性結合。
2. 組織樣本制備
石蠟切片：依次放入二甲苯（2次，每次10分鐘）、梯度乙醇（100%→95%→80%→70%，各5分鐘）脫蠟水化；檸檬酸緩沖液（pH6.0）熱修復10-15分鐘，自然冷卻至室溫。
新鮮組織：取材后立即用4%多聚甲醛固定24-48小時，或-80℃冷凍保存；冷凍切片厚度控制在5-10μm，貼片后自然干燥30分鐘。
3. WB蛋白樣本制備
用RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制劑）冰上裂解細胞30分鐘，12000rpm離心15分鐘取上清。
BCA法或Bradford法定量蛋白濃度，調(diào)整至上樣量一致；加入5×SDS上樣緩沖液，95℃加熱5-10分鐘變性，-20℃保存?zhèn)溆谩?/span>
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