BF647標(biāo)記的HA tag標(biāo)簽抗體
原理特點(diǎn)
本抗體為HA標(biāo)簽特異性抗體，搭配BF647穩(wěn)定遠(yuǎn)紅外熒光標(biāo)記，可特異性識(shí)別外源表達(dá)蛋白中的HA標(biāo)簽序列，不結(jié)合細(xì)胞內(nèi)源性蛋白。HA標(biāo)簽是融合蛋白表達(dá)、蛋白純化、蛋白定位的經(jīng)典標(biāo)簽，該抗體特異性強(qiáng)、背景極低，熒光信號(hào)穩(wěn)定，可快速檢測(cè)HA融合蛋白的表達(dá)、定位與表達(dá)量，適配多色免疫熒光共染、流式檢測(cè)、組織樣本定位實(shí)驗(yàn)，適用于分子克隆與蛋白功能驗(yàn)證研究。
英文名稱:HA tag Rabbit pAb, BF647 conjugated
中文名稱:BF647標(biāo)記的HA tag標(biāo)簽抗體
英文別名：HA-tag; HA epitope tag; HA1; HA2; hemagglutinin; Hemagglutinin HA1 chain; Hemagglutinin HA2.
靶標(biāo)：HA 標(biāo)簽（氨基酸序列 YPYDVPDYA，流感血凝素短肽標(biāo)簽）
熒光標(biāo)記：BF647；Ex=647 nm，Em=666 nm
抗體類型：小鼠單克隆（4D1 經(jīng)典克?。?/span>
種屬反應(yīng)：無(wú)物種限制，僅識(shí)別外源 HA 融合標(biāo)簽蛋白
適用實(shí)驗(yàn)：IF、流式、WB、IP 驗(yàn)證外源蛋白表達(dá)
功能用途：質(zhì)粒過(guò)表達(dá)蛋白檢測(cè)、蛋白互作、亞細(xì)胞定位示蹤
儲(chǔ)存：-20℃避光保存
靶點(diǎn)背景
1. HA 標(biāo)簽（YPYDVPDYA）是外源蛋白常用短肽標(biāo)簽，融合在目的蛋白末端
2. 不影響靶蛋白天然構(gòu)象，用于外源過(guò)表達(dá)蛋白特異性識(shí)別富集
3. 免疫熒光、WB、Co-IP 檢測(cè)外源轉(zhuǎn)染蛋白表達(dá)與互作
核心實(shí)驗(yàn)操作方法
1. Western Blot（WB）
抗體孵育
一抗孵育：用5%脫脂牛奶或BSA稀釋抗體至推薦濃度（如1:1000），4℃搖床緩慢孵育過(guò)夜；或室溫孵育1-2小時(shí)，孵育時(shí)保證膜完全浸沒(méi)在抗體溶液中。
洗滌：用TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘，洗去未結(jié)合的一抗；加入HRP標(biāo)記二抗（1:5000-1:10000稀釋），室溫孵育1小時(shí)。
顯影：再次洗滌后，加入ECL發(fā)光液孵育1-2分鐘，用化學(xué)發(fā)光成像儀采集圖像，根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度調(diào)整曝光時(shí)間。
2. 免疫組化（IHC）
抗體孵育
一抗孵育：滴加稀釋后的一抗（如1:200）于組織切片上，置于濕盒中4℃孵育過(guò)夜；次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入生物素標(biāo)記二抗（1:200）室溫孵育30分鐘，PBS沖洗后加入ABC復(fù)合物（1:100）室溫孵育30分鐘。
顯色封片：DAB顯色劑顯色3-10分鐘（顯微鏡下觀察控制時(shí)間），蘇木素復(fù)染1分鐘，梯度乙醇脫水后中性樹(shù)膠封片。
3. 免疫熒光（IF）
抗體孵育
一抗孵育：用5% BSA稀釋抗體至工作濃度（如1:100），滴加在細(xì)胞爬片上，4℃避光孵育過(guò)夜；室溫復(fù)溫后PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入熒光標(biāo)記二抗（如FITC標(biāo)記抗兔IgG，1:200），室溫避光孵育30-60分鐘；PBS沖洗后用抗淬滅封片液封片。
觀察：熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察，激發(fā)波長(zhǎng)根據(jù)二抗標(biāo)記物選擇（如FITC為488nm）。
4. ELISA實(shí)驗(yàn)
包被與孵育
包被：用包被緩沖液（pH9.6碳酸鹽緩沖液）稀釋抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃過(guò)夜孵育。
封閉與一抗孵育：棄去包被液，PBST洗滌3次，加入5% BSA封閉液200μl/孔，37℃孵育1小時(shí)；加入稀釋后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小時(shí)或4℃過(guò)夜。
檢測(cè)：洗滌后加入酶標(biāo)二抗（1:5000），37℃孵育1小時(shí)；TMB底物溶液顯色10-30分鐘，2M硫酸終止反應(yīng)后，酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)讀取OD值。
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關(guān)鍵字： BF647標(biāo)記的HA tag標(biāo)簽抗體;HA tag Rabbit pAb, B;100ul;
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