北京生夏蛋白技術(shù)有限公司/北京華利世
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質(zhì)譜級rLys-蛋白酶特異性水解在賴氨酸片段的C端的肽鍵?？捎糜谔岣邔Σ灰姿獾牡鞍踪|(zhì)的消化; 推薦在6-8M尿素溶液中進行

物理形態(tài): 質(zhì)譜級rLys-C蛋白酶是凍干粉，含0.5mg海藻糖/瓶

分子量:27kDa.

溶解液（HLS HAc001C）：rLys-C蛋白酶復(fù)溶解緩沖液建議50mM醋酸

儲存條件：凍干粉末存儲在-20℃冰箱，再溶解的酶儲存在-20℃。有效期見產(chǎn)品標簽

保質(zhì)期：凍干粉-20℃保質(zhì)期24個月

pH 值范圍: 在8-9 時，rLys-C 具有很好的活性

適用范圍：rLys-蛋白酶特異性水解變性后比較不易酶切的蛋白質(zhì)K位，推薦和Trypsin混合使用。

混合酶推薦SOP:

A. 通用溶液酶解法

100ug Trypsin/20ug rLys-C 混合酶按照 25:1 蛋白和蛋白酶的量(w/w)使用, 37°C恒溫過夜13-16小時.

溫馨提示：尿素的濃度最好小于1M, 50mM Tris-HCl 緩沖溶液(pH 8)

B. 1+1步溶液酶解法

1. 100ug Trypsin/20ug rLys-C 混合酶按照25:1 蛋白和蛋白酶的量(w/w)使用, 37°C.恒溫酶解2-4小時.

溫馨提示：尿素的濃度為6-8M, 50mM Tris-HCl 緩沖溶液(pH 8)

2. 稀釋上一步的溶液6倍，37°C恒溫過夜13-16小時

溫馨提示：尿素的濃度最好小于1M, 50mM Tris-HCl 緩沖溶液(pH 8)

質(zhì)量控制｜Quality Control

純度： 液相色譜280nm檢測雜質(zhì)蛋白質(zhì)峰強度，rLys-C峰強度大于99.9%

專一性：E.coli大腸桿菌樣品，ESI-MS/MS質(zhì)譜分析K端的專一性大于99.5%

活性:25unit/min/mg; 單位定義：rLys-c白蛋酶每分鐘酶切1.0 umole T-G-P Lys Nitroanilide的量，反應(yīng)條件：25℃，波長405nm

Maldi TOF質(zhì)譜檢測: 純化后的蛋白酶使用HCCA基質(zhì)激光解析質(zhì)譜分析未見雜質(zhì)蛋白質(zhì)峰

LC-MS/MS 質(zhì)譜分析: 使用rLys-c酶解HSA(人血清白蛋白，純度99.9%)實驗，DTT還原，IAA保護,PH8.0, 37°C恒溫過夜16小時,液質(zhì)QE聯(lián)

用儀分析，覆蓋率87%