大鼠表皮轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(TGM3)重組蛋白用于蛋白交聯(lián)酶活性測(cè)定、表皮角質(zhì)分化、皮膚屏障形成及皮膚病變相關(guān)機(jī)理研究實(shí)驗(yàn)。
型號(hào):YS-DB2765
產(chǎn)品名稱:大鼠表皮轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(TGM3)重組蛋白
物種:Rattus norvegicus (Rat,大鼠)
英文名稱:Recombinant Transglutaminase 3, Epidermal (TGM3)
TGE; Egt; Protein-Glutamine Gamma-Glutamyltransferase E; Transglutaminase E
酶與激酶
感染免疫
皮膚病學(xué)
物種:Rattus norvegicus (Rat,大鼠)
來源:原核表達(dá)
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)
亞細(xì)胞定位::n/a
預(yù)測(cè)分子量:28.8kDa
實(shí)際分子量:31kDa(差異分析請(qǐng)參閱說明書)
片段與標(biāo)簽:Ala468~Glu693 with N-terminal His Tag
緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)
性狀:凍干粉
純度:> 90%
等電點(diǎn):6.0
應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格:10μg、50μg、200μg、1mg、5mg
檢測(cè)原理:

純度檢測(cè)(SDS-PAGE):電泳染色評(píng)估條帶純度,檢測(cè)蛋白降解聚合;
分子量驗(yàn)證:條帶位置比對(duì) Marker,匹配 TGM3 理論分子量;
濃度定量(BCA 法):蛋白介導(dǎo) BCA 顯色,標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算蛋白濃度;
轉(zhuǎn)酰胺酶活檢測(cè):催化蛋白谷氨酰胺與賴氨酸交聯(lián),熒光標(biāo)記底物交聯(lián)產(chǎn)物定量測(cè)定酶活性。
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常見實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景操作指南:

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
濃度優(yōu)化:先設(shè)置預(yù)實(shí)驗(yàn)梯度(如0.1ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL),檢測(cè)細(xì)胞增殖、分化或信號(hào)通路激活情況,確定最優(yōu)工作濃度。
添加時(shí)機(jī):細(xì)胞接種后24-48小時(shí),待細(xì)胞貼壁且狀態(tài)穩(wěn)定時(shí)添加重組蛋白。
更換培養(yǎng)基:若蛋白半衰期較短,需每隔24-48小時(shí)更換含新鮮蛋白的培養(yǎng)基。
免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
陽(yáng)性對(duì)照設(shè)置:在ELISA或WB實(shí)驗(yàn)中,用已知濃度的重組蛋白制備標(biāo)準(zhǔn)曲線,確保定量準(zhǔn)確性。
封閉處理:若蛋白用于包被ELISA板,包被后需用5%脫脂牛奶或BSA封閉,降低非特異性結(jié)合。
抗體配對(duì):選擇針對(duì)不同表位的捕獲抗體和檢測(cè)抗體,避免與重組蛋白的標(biāo)簽產(chǎn)生交叉反應(yīng)。
蛋白相互作用實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽選擇:若使用Pull-down實(shí)驗(yàn),優(yōu)先選擇GST或His標(biāo)簽的重組蛋白,便于親和層析分離。
反應(yīng)條件:在生理緩沖液(如PBS)中進(jìn)行,溫度控制在4℃,避免蛋白變性。
陰性對(duì)照:設(shè)置不含目標(biāo)蛋白的對(duì)照組,排除標(biāo)簽非特異性結(jié)合的干擾。
關(guān)鍵字: 大鼠表皮轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶;TGM3;重組蛋白;
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