人Ⅻ組磷脂酶A2(PLA2G12)重組蛋白開展膜磷脂水解活性檢測、細胞脂質(zhì)信號傳導、腫瘤微環(huán)境脂質(zhì)調(diào)控體外功能驗證實驗。
型號：YS-DB2466
產(chǎn)品名稱：人Ⅻ組磷脂酶A2(PLA2G12)重組蛋白
物種：Homo sapiens (Human，人)
英文名稱：Recombinant Phospholipase A2, Group XII (PLA2G12)
PLA2G12A; sPLA2-XII; GXII sPLA2; Group XIIA secretory phospholipase A2; Phosphatidylcholine 2-acylhydrolase 12A
酶與激酶
物種：Homo sapiens (Human，人)
來源：原核表達
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細胞定位：：分泌, 細胞質(zhì)
預測分子量：22.4kDa
實際分子量：22kDa(差異分析請參閱說明書)
片段與標簽：Gln23~Leu189 with N-terminal His Tag
緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）
性狀：凍干粉
純度：> 90%
等電點：6.3
應用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格：10μg、50μg、200μg、1mg、5mg
檢測原理：
磷脂酰酯鍵水解催化機制：PLA2G12 水解甘油磷脂 sn-2 酯鍵，底物消耗速率判定重組酶活性高低。
比色法高通量酶活測定：商品化顯色磷脂底物，終點吸光度換算重組 PLA2G12 活性單位。
脂質(zhì)產(chǎn)物高效液相定量：分離定量兩類水解產(chǎn)物，精準測算催化轉(zhuǎn)化率。
免疫檢測重組蛋白質(zhì)量：特異性抗體鑒定蛋白表達、純度及有無降解片段。
公司正在出售的產(chǎn)品：
α1-抗胰蛋白酶(a1AT)重組蛋白 | Recombinant Human ARID3A | 克侖特羅牛血清白蛋白偶聯(lián)物 |
α1-抗胰蛋白酶(a1AT)重組蛋白 | Recombinant Human CXCR4 | 細胞信號轉(zhuǎn)導分子SMAD5封閉多肽 |
乳酸脫氫酶B(LDHB)重組蛋白 | Recombinant Human TRIM46 | 核轉(zhuǎn)錄因子SOX8封閉多肽 |
乳酸脫氫酶B(LDHB)重組蛋白 | Recombinant Human Dectin-1 | α2C-AR腎上能受體封閉多肽 |
血小板型磷酸果糖激酶(PFKP)重組蛋白 | Recombinant Human TRIM46 | 絲裂原活化蛋白激酶15封閉多肽 |
法尼基二磷酸法尼基轉(zhuǎn)移酶1(FDFT1)重組蛋白 | Recombinant Mouse PIINP | 中心體蛋白1封閉多肽 |
蛋白激酶Bβ(PKBb)重組蛋白 | 人Ⅻ組磷脂酶A2(PLA2G12)重組蛋白Recombinant Human VCP | 細胞表面蛋白CD232封閉多肽 |
胱天蛋白酶4(CASP4)重組蛋白 | Recombinant Mouse Akr1b1 | 磷酸二酯酶6β封閉多肽 |
乳酸脫氫酶B(LDHB)重組蛋白 | Recombinant Human MYL6B | Tuberin樣蛋白1封閉多肽 |
使用方法：
1. 蛋白復溶
解凍：從低溫冰箱取出蛋白后，立即置于冰上緩慢解凍，避免室溫放置導致蛋白變性。
緩沖液選擇：根據(jù)蛋白特性選擇合適的復溶緩沖液，常用基礎(chǔ)緩沖液為10-50mM Tris-HCl（pH7.0-8.0）或PBS（pH7.2-7.4）；部分蛋白需添加100-300mM NaCl維持滲透壓，或添加1-5mM DTT、β-巰基乙醇等還原劑保持蛋白穩(wěn)定性。
復溶操作：根據(jù)蛋白濃度，加入適量緩沖液使終濃度達到0.1-1.0mg/mL（部分難溶蛋白可適當調(diào)整濃度）；輕輕顛倒離心管或用移液器緩慢吹打混勻，避免劇烈震蕩；置于冰上靜置10-30分鐘，期間可輕柔混勻2-3次，確保蛋白充分溶解。
2. 活性測定（以酶類蛋白為例）
試劑準備：根據(jù)酶的催化特性，配制相應的底物溶液、輔助因子溶液、反應緩沖液等；確保所有試劑均為分析純以上級別，且在有效期內(nèi)。
反應體系優(yōu)化：通過預實驗確定酶的最適反應溫度、pH值、底物濃度、酶濃度等參數(shù)；通常反應體系體積為50-200μL，酶濃度需根據(jù)活性高低調(diào)整。
檢測操作：按照優(yōu)化后的反應體系依次加入試劑，啟動反應后，通過分光光度法、熒光法、比色法等檢測方法，實時或終點檢測底物消耗、產(chǎn)物生成的信號變化。
活性計算：根據(jù)檢測到的信號變化值，結(jié)合摩爾消光系數(shù)、熒光量子產(chǎn)率等參數(shù)，計算酶的活性單位（U）；1U定義為在特定條件下，每分鐘催化1μmol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的酶量。
3. Western Blot檢測
樣品處理：取適量復溶后的蛋白溶液，加入等體積的2×SDS上樣緩沖液，沸水浴加熱5-10分鐘使蛋白變性；若蛋白含二硫鍵，可添加β-巰基乙醇或DTT輔助變性。
電泳分離：將變性后的樣品加入SDS-PAGE凝膠的上樣孔，同時加入蛋白Marker；先以80V電壓運行濃縮膠（約30分鐘），待樣品進入分離膠后，調(diào)整電壓至120V繼續(xù)電泳（約60-90分鐘），直至蛋白Marker分離清晰。
轉(zhuǎn)膜操作：根據(jù)蛋白分子量選擇合適孔徑的PVDF或NC膜；采用濕轉(zhuǎn)或半干轉(zhuǎn)法將凝膠中的蛋白轉(zhuǎn)移至膜上，濕轉(zhuǎn)條件通常為200-300mA電流，轉(zhuǎn)膜時間60-120分鐘；轉(zhuǎn)膜后可通過麗春紅染色確認轉(zhuǎn)膜效果。
封閉與孵育：用5%脫脂牛奶或BSA溶液封閉膜1-2小時，封閉非特異性結(jié)合位點；加入一抗（按說明書推薦比例稀釋），4℃孵育過夜；次日用TBST緩沖液洗膜3次，每次10分鐘；加入HRP標記的二抗（按說明書推薦比例稀釋），室溫孵育1小時；再次用TBST緩沖液洗膜3次，每次10分鐘。
顯色檢測：將膜浸入ECL化學發(fā)光試劑中，避光孵育1-5分鐘；使用化學發(fā)光成像系統(tǒng)曝光檢測蛋白條帶，根據(jù)條帶位置和灰度分析蛋白表達情況。
關(guān)鍵字： 人Ⅻ組磷脂酶A2;PLA2G12;重組蛋白;
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