人丙酰輔酶A羧化酶α(PCCa)重組蛋白適用于 PCCα 羧化酶活性測(cè)定、支鏈氨基酸代謝通路研究、有機(jī)酸代謝病機(jī)制分析、酶動(dòng)力學(xué)檢測(cè)及互作蛋白篩選。
型號(hào)：YS-DB2457
產(chǎn)品名稱：人丙酰輔酶A羧化酶α(PCCa)重組蛋白
物種：Homo sapiens (Human，人)
英文名稱：Recombinant Propionyl Coenzyme A Carboxylase Alpha (PCCa)
Propanoyl-CoA:carbon dioxide ligase subunit alpha; Propionyl-CoA carboxylase alpha chain, mitochondrial
酶與激酶
物種：Homo sapiens (Human，人)
來源：原核表達(dá)
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)
亞細(xì)胞定位：：線粒體
預(yù)測(cè)分子量：19.4kDa
實(shí)際分子量：19kDa(差異分析請(qǐng)參閱說明書)
片段與標(biāo)簽：Val580~Glu728 with N-terminal His Tag
緩沖液成份：100mM NaHCO3, 500mM NaCl緩沖液（pH8.3,含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）
性狀：凍干粉
純度：> 95%
等電點(diǎn)：4.8
應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格：10μg、50μg、200μg、1mg、5mg
檢測(cè)原理：
SDS-PAGE 純度分析：電泳分離雜質(zhì)蛋白，灰度積分計(jì)算蛋白純度。
Bradford 染料結(jié)合測(cè)濃度：快速定量蛋白樣品濃度。
羧化酶活性檢測(cè)：催化丙酰輔酶 A 羧化生成甲基丙二酰輔酶 A，色譜法檢測(cè)產(chǎn)物生成速率評(píng)價(jià)酶活。
qPCR 宿主基因組 DNA 殘留檢測(cè)：去除核酸雜質(zhì)干擾。
公司正在出售的產(chǎn)品：
過氧化氫酶(CAT)重組蛋白 | Recombinant Human MCCC2 | 磷酸化腫瘤抑制基因LATS1封閉多肽 |
過氧化氫酶(CAT)重組蛋白 | Recombinant Human TNNI1 | 染色質(zhì)修飾蛋白2B封閉多肽 |
過氧化氫酶(CAT)重組蛋白 | Recombinant Human CD68 | 肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白1封閉多肽 |
脫氧胞苷激酶(DCK)重組蛋白 | Recombinant Human GYPA | 整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣1蛋白封閉多肽 |
脂肪酸合酶(FASN)重組蛋白 | Recombinant Human CD68 | 剪切和多聚腺苷酸化特異性因子5封閉多肽 |
脂肪酸去飽和酶1(FADS1)重組蛋白 | Recombinant Human Nectin-1 | 基質(zhì)細(xì)胞衍生因子－1封閉多肽 |
脂肪酸合酶(FASN)重組蛋白 | 人丙酰輔酶A羧化酶α(PCCa)重組蛋白Recombinant Human CCNB1 | G蛋白偶聯(lián)受體RDC1蛋白封閉多肽 |
脂肪酸合酶(FASN)重組蛋白 | Recombinant Mouse IL-6 | 液泡蛋白分選蛋白25封閉多肽 |
脂肪酸去飽和酶1(FADS1)重組蛋白 | Recombinant Human CHRNA7 | 血管緊張素Ⅱ受體2封閉多肽 |
使用方法：
1. 蛋白復(fù)溶
解凍：從低溫冰箱取出蛋白后，立即置于冰上緩慢解凍，避免室溫放置導(dǎo)致蛋白變性。
緩沖液選擇：根據(jù)蛋白特性選擇合適的復(fù)溶緩沖液，常用基礎(chǔ)緩沖液為10-50mM Tris-HCl（pH7.0-8.0）或PBS（pH7.2-7.4）；部分蛋白需添加100-300mM NaCl維持滲透壓，或添加1-5mM DTT、β-巰基乙醇等還原劑保持蛋白穩(wěn)定性。
復(fù)溶操作：根據(jù)蛋白濃度，加入適量緩沖液使終濃度達(dá)到0.1-1.0mg/mL（部分難溶蛋白可適當(dāng)調(diào)整濃度）；輕輕顛倒離心管或用移液器緩慢吹打混勻，避免劇烈震蕩；置于冰上靜置10-30分鐘，期間可輕柔混勻2-3次，確保蛋白充分溶解。
2. 活性測(cè)定（以酶類蛋白為例）
試劑準(zhǔn)備：根據(jù)酶的催化特性，配制相應(yīng)的底物溶液、輔助因子溶液、反應(yīng)緩沖液等；確保所有試劑均為分析純以上級(jí)別，且在有效期內(nèi)。
反應(yīng)體系優(yōu)化：通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定酶的最適反應(yīng)溫度、pH值、底物濃度、酶濃度等參數(shù)；通常反應(yīng)體系體積為50-200μL，酶濃度需根據(jù)活性高低調(diào)整。
檢測(cè)操作：按照優(yōu)化后的反應(yīng)體系依次加入試劑，啟動(dòng)反應(yīng)后，通過分光光度法、熒光法、比色法等檢測(cè)方法，實(shí)時(shí)或終點(diǎn)檢測(cè)底物消耗、產(chǎn)物生成的信號(hào)變化。
活性計(jì)算：根據(jù)檢測(cè)到的信號(hào)變化值，結(jié)合摩爾消光系數(shù)、熒光量子產(chǎn)率等參數(shù)，計(jì)算酶的活性單位（U）；1U定義為在特定條件下，每分鐘催化1μmol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的酶量。
3. Western Blot檢測(cè)
樣品處理：取適量復(fù)溶后的蛋白溶液，加入等體積的2×SDS上樣緩沖液，沸水浴加熱5-10分鐘使蛋白變性；若蛋白含二硫鍵，可添加β-巰基乙醇或DTT輔助變性。
電泳分離：將變性后的樣品加入SDS-PAGE凝膠的上樣孔，同時(shí)加入蛋白Marker；先以80V電壓運(yùn)行濃縮膠（約30分鐘），待樣品進(jìn)入分離膠后，調(diào)整電壓至120V繼續(xù)電泳（約60-90分鐘），直至蛋白Marker分離清晰。
轉(zhuǎn)膜操作：根據(jù)蛋白分子量選擇合適孔徑的PVDF或NC膜；采用濕轉(zhuǎn)或半干轉(zhuǎn)法將凝膠中的蛋白轉(zhuǎn)移至膜上，濕轉(zhuǎn)條件通常為200-300mA電流，轉(zhuǎn)膜時(shí)間60-120分鐘；轉(zhuǎn)膜后可通過麗春紅染色確認(rèn)轉(zhuǎn)膜效果。
封閉與孵育：用5%脫脂牛奶或BSA溶液封閉膜1-2小時(shí)，封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)；加入一抗（按說明書推薦比例稀釋），4℃孵育過夜；次日用TBST緩沖液洗膜3次，每次10分鐘；加入HRP標(biāo)記的二抗（按說明書推薦比例稀釋），室溫孵育1小時(shí)；再次用TBST緩沖液洗膜3次，每次10分鐘。
顯色檢測(cè)：將膜浸入ECL化學(xué)發(fā)光試劑中，避光孵育1-5分鐘；使用化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)曝光檢測(cè)蛋白條帶，根據(jù)條帶位置和灰度分析蛋白表達(dá)情況。
關(guān)鍵字： 人丙酰輔酶A羧化酶α;PCCa;重組蛋白;
上海研生實(shí)業(yè)有限公司成立于2011年專業(yè)銷售各種科學(xué)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品，包括分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、等多個(gè)研究及應(yīng)用領(lǐng)域。旗下有“上研生"品牌。
我們努力將歐美進(jìn)口品牌的產(chǎn)品推薦給各類研究人員；另一方面也非常重視國內(nèi)科研市場(chǎng)的產(chǎn)品開發(fā)，推出了一系列具有競(jìng)爭(zhēng)力的產(chǎn)品和服務(wù)。
同時(shí)國家對(duì)于生物行業(yè)的發(fā)展給予極大的重視，更多地側(cè)重于科研的投入。公司的服務(wù)和業(yè)務(wù)在同行獲得認(rèn)可。也具備豐富的管理經(jīng)驗(yàn)，同時(shí)我們建立了集技術(shù)支持、售后服務(wù)等多方位的服務(wù)體系。我們有激情、有理想，更有責(zé)任感，是您科研道路上值得信賴的伙伴。
公司的理念是：以誠信為本，努力打造優(yōu)質(zhì)品牌，為您提供產(chǎn)品的售中、售后服務(wù)。