人蛋白酪氨酸磷酸酶ⅣA1(PTP4A1)重組蛋白適用于磷酸酶酶活測定、底物結合分析、腫瘤增殖相關信號調控體外功能探究。
型號：YS-DB2404
產品名稱：人蛋白酪氨酸磷酸酶ⅣA1(PTP4A1)重組蛋白
物種：Homo sapiens (Human，人)
英文名稱：Recombinant Protein Tyrosine Phosphatase Type IVA 1 (PTP4A1)
PRL1; HH72; PRL-1; PTP(CAAX1); PTPCAAX1; Protein-tyrosine phosphatase of regenerating liver 1; Protein-tyrosine phosphatase 4a1
酶與激酶
物種：Homo sapiens (Human，人)
來源：原核表達
宿主E.coli
內毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細胞定位：：細胞膜, 細胞質
預測分子量：23.5kDa
實際分子量：24kDa(差異分析請參閱說明書)
片段與標簽：Met1~Gln173 with N-terminal His Tag
緩沖液成份：100mM NaHCO3, 500mM NaCl緩沖液（pH8.3,含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）
性狀：凍干粉
純度：> 95%
等電點：9.2
應用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格：10μg、50μg、200μg、1mg、5mg
檢測原理：
WB 特異性驗證：PTP4A1 特異性抗體特異性識別重組蛋白抗原表位，雜交條帶位置匹配理論分子量，確認蛋白身份無誤。
SDS-PAGE 純度分析：電泳分離雜蛋白與目標蛋白，染色后灰度定量，計算目標蛋白純度，判斷純化工藝效果。
BCA 法濃度測定：蛋白還原銅離子發(fā)生顯色反應，吸光度線性對應蛋白總量，擬合標準曲線精準定量蛋白濃度。
磷酸酶活性檢測：選用磷酸化酪氨酸小分子底物，PTP4A1 水解底物磷酸基團；檢測產物吸光度變化，定量磷酸酯酶水解催化活性。
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使用方法：
1. 蛋白復溶
解凍：從低溫冰箱取出蛋白后，立即置于冰上緩慢解凍，避免室溫放置導致蛋白變性。
緩沖液選擇：根據蛋白特性選擇合適的復溶緩沖液，常用基礎緩沖液為10-50mM Tris-HCl（pH7.0-8.0）或PBS（pH7.2-7.4）；部分蛋白需添加100-300mM NaCl維持滲透壓，或添加1-5mM DTT、β-巰基乙醇等還原劑保持蛋白穩(wěn)定性。
復溶操作：根據蛋白濃度，加入適量緩沖液使終濃度達到0.1-1.0mg/mL（部分難溶蛋白可適當調整濃度）；輕輕顛倒離心管或用移液器緩慢吹打混勻，避免劇烈震蕩；置于冰上靜置10-30分鐘，期間可輕柔混勻2-3次，確保蛋白充分溶解。
2. 活性測定（以酶類蛋白為例）
試劑準備：根據酶的催化特性，配制相應的底物溶液、輔助因子溶液、反應緩沖液等；確保所有試劑均為分析純以上級別，且在有效期內。
反應體系優(yōu)化：通過預實驗確定酶的最適反應溫度、pH值、底物濃度、酶濃度等參數(shù)；通常反應體系體積為50-200μL，酶濃度需根據活性高低調整。
檢測操作：按照優(yōu)化后的反應體系依次加入試劑，啟動反應后，通過分光光度法、熒光法、比色法等檢測方法，實時或終點檢測底物消耗、產物生成的信號變化。
活性計算：根據檢測到的信號變化值，結合摩爾消光系數(shù)、熒光量子產率等參數(shù)，計算酶的活性單位（U）；1U定義為在特定條件下，每分鐘催化1μmol底物轉化為產物的酶量。
3. Western Blot檢測
樣品處理：取適量復溶后的蛋白溶液，加入等體積的2×SDS上樣緩沖液，沸水浴加熱5-10分鐘使蛋白變性；若蛋白含二硫鍵，可添加β-巰基乙醇或DTT輔助變性。
電泳分離：將變性后的樣品加入SDS-PAGE凝膠的上樣孔，同時加入蛋白Marker；先以80V電壓運行濃縮膠（約30分鐘），待樣品進入分離膠后，調整電壓至120V繼續(xù)電泳（約60-90分鐘），直至蛋白Marker分離清晰。
轉膜操作：根據蛋白分子量選擇合適孔徑的PVDF或NC膜；采用濕轉或半干轉法將凝膠中的蛋白轉移至膜上，濕轉條件通常為200-300mA電流，轉膜時間60-120分鐘；轉膜后可通過麗春紅染色確認轉膜效果。
封閉與孵育：用5%脫脂牛奶或BSA溶液封閉膜1-2小時，封閉非特異性結合位點；加入一抗（按說明書推薦比例稀釋），4℃孵育過夜；次日用TBST緩沖液洗膜3次，每次10分鐘；加入HRP標記的二抗（按說明書推薦比例稀釋），室溫孵育1小時；再次用TBST緩沖液洗膜3次，每次10分鐘。
顯色檢測：將膜浸入ECL化學發(fā)光試劑中，避光孵育1-5分鐘；使用化學發(fā)光成像系統(tǒng)曝光檢測蛋白條帶，根據條帶位置和灰度分析蛋白表達情況。
關鍵字： 人蛋白酪氨酸磷酸酶ⅣA1;PTP4A1;重組蛋白;
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