小鼠環(huán)氧化合物水解酶4(EPHX4)重組蛋白用于外源毒物解毒代謝、脂質(zhì)環(huán)氧化物降解、炎癥及心血管相關(guān)水解酶活檢測實驗。
型號：YS-DB30
產(chǎn)品名稱：小鼠環(huán)氧化合物水解酶4(EPHX4)重組蛋白
物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)
英文名稱：Recombinant Epoxide Hydrolase 4 (EPHX4)
ABHD7; EPHXRP; Abhydrolase Domain Containing 7; Epoxide hydrolase-related protein
酶與激酶
物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)
來源：原核表達
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細胞定位：：n/a
預(yù)測分子量：41.3kDa
實際分子量：38kDa(差異分析請參閱說明書)
片段與標簽：Lys36~Asp359 with
緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）
性狀：凍干粉
純度：> 95%
等電點：-
應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格：10μg、50μg、200μg、1mg、5mg
檢測原理：
環(huán)氧底物水解熒光檢測：EPHX4 水解環(huán)氧類熒光底物，開環(huán)后釋放熒光基團，熒光強度增量定量水解酶活性。
WB 特異性抗體鑒定：EPHX4 特異性抗體識別重組蛋白，條帶分子量匹配理論值，驗證目的蛋白。
HPLC 底物產(chǎn)物分離定量：高效液相色譜分離剩余環(huán)氧底物與水解二醇產(chǎn)物，峰面積計算水解轉(zhuǎn)化率。
SDS-PAGE 灰度純度分析：電泳灰度計算蛋白純度，檢測雜蛋白、蛋白降解、聚集雜質(zhì)。
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使用方法：
1. 蛋白復(fù)溶
解凍：從低溫冰箱取出蛋白后，立即置于冰上緩慢解凍，避免室溫放置導(dǎo)致蛋白變性。
緩沖液選擇：根據(jù)蛋白特性選擇合適的復(fù)溶緩沖液，常用基礎(chǔ)緩沖液為10-50mM Tris-HCl（pH7.0-8.0）或PBS（pH7.2-7.4）；部分蛋白需添加100-300mM NaCl維持滲透壓，或添加1-5mM DTT、β-巰基乙醇等還原劑保持蛋白穩(wěn)定性。
復(fù)溶操作：根據(jù)蛋白濃度，加入適量緩沖液使終濃度達到0.1-1.0mg/mL（部分難溶蛋白可適當(dāng)調(diào)整濃度）；輕輕顛倒離心管或用移液器緩慢吹打混勻，避免劇烈震蕩；置于冰上靜置10-30分鐘，期間可輕柔混勻2-3次，確保蛋白充分溶解。
2. 活性測定（以酶類蛋白為例）
試劑準備：根據(jù)酶的催化特性，配制相應(yīng)的底物溶液、輔助因子溶液、反應(yīng)緩沖液等；確保所有試劑均為分析純以上級別，且在有效期內(nèi)。
反應(yīng)體系優(yōu)化：通過預(yù)實驗確定酶的最適反應(yīng)溫度、pH值、底物濃度、酶濃度等參數(shù)；通常反應(yīng)體系體積為50-200μL，酶濃度需根據(jù)活性高低調(diào)整。
檢測操作：按照優(yōu)化后的反應(yīng)體系依次加入試劑，啟動反應(yīng)后，通過分光光度法、熒光法、比色法等檢測方法，實時或終點檢測底物消耗、產(chǎn)物生成的信號變化。
活性計算：根據(jù)檢測到的信號變化值，結(jié)合摩爾消光系數(shù)、熒光量子產(chǎn)率等參數(shù)，計算酶的活性單位（U）；1U定義為在特定條件下，每分鐘催化1μmol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的酶量。
3. Western Blot檢測
樣品處理：取適量復(fù)溶后的蛋白溶液，加入等體積的2×SDS上樣緩沖液，沸水浴加熱5-10分鐘使蛋白變性；若蛋白含二硫鍵，可添加β-巰基乙醇或DTT輔助變性。
電泳分離：將變性后的樣品加入SDS-PAGE凝膠的上樣孔，同時加入蛋白Marker；先以80V電壓運行濃縮膠（約30分鐘），待樣品進入分離膠后，調(diào)整電壓至120V繼續(xù)電泳（約60-90分鐘），直至蛋白Marker分離清晰。
轉(zhuǎn)膜操作：根據(jù)蛋白分子量選擇合適孔徑的PVDF或NC膜；采用濕轉(zhuǎn)或半干轉(zhuǎn)法將凝膠中的蛋白轉(zhuǎn)移至膜上，濕轉(zhuǎn)條件通常為200-300mA電流，轉(zhuǎn)膜時間60-120分鐘；轉(zhuǎn)膜后可通過麗春紅染色確認轉(zhuǎn)膜效果。
封閉與孵育：用5%脫脂牛奶或BSA溶液封閉膜1-2小時，封閉非特異性結(jié)合位點；加入一抗（按說明書推薦比例稀釋），4℃孵育過夜；次日用TBST緩沖液洗膜3次，每次10分鐘；加入HRP標記的二抗（按說明書推薦比例稀釋），室溫孵育1小時；再次用TBST緩沖液洗膜3次，每次10分鐘。
顯色檢測：將膜浸入ECL化學(xué)發(fā)光試劑中，避光孵育1-5分鐘；使用化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)曝光檢測蛋白條帶，根據(jù)條帶位置和灰度分析蛋白表達情況。
關(guān)鍵字： 小鼠環(huán)氧化合物水解酶4;EPHX4;重組蛋白;
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