雙抗體夾心 ELISA，酶標(biāo)板預(yù)包被抗大鼠 26S PSM 捕獲抗體，樣本中 26S 蛋白酶體與固相抗體特異性結(jié)合，再加入酶標(biāo)檢測抗體形成夾心免疫復(fù)合物，充分洗滌后底物顯色，吸光度數(shù)值對應(yīng)靶蛋白濃度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線完成定量檢測。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 大鼠26S蛋白酶體(26S PSM)ELISA試劑盒 | 貨號 | Y-E1167 |
英文名稱 | 26S PSM ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低檢測限0.15ng/mL，適配組織、細(xì)胞勻漿樣本微量檢測
檢測范圍：0.3ng/mL - 30ng/mL
反應(yīng)時間：總反應(yīng)時長105分鐘，樣本孵育70分鐘，二抗孵育35分鐘
保存條件：試劑盒2-8℃避光冷藏，蛋白類試劑嚴(yán)禁反復(fù)凍融
有效期：原裝未拆封有效期6個月
顯色系統(tǒng)：穩(wěn)定型TMB底物顯色，顯色均勻，無批次差異
檢測波長：450nm、630nm雙波長檢測校正
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：6個濃度梯度，四參數(shù)擬合曲線，R2≥0.995
特異性：特異性結(jié)合大鼠26S蛋白酶體，不與20S蛋白酶體及其他蛋白酶交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤5%，板間CV≤7.5%
注意事項：組織勻漿需充分裂解、高速離心去除殘渣；樣本避免高溫處理，防止蛋白變性；孵育溫度嚴(yán)格恒定37℃
關(guān)鍵注意事項：
實驗前需仔細(xì)閱讀對應(yīng)試劑盒的說明書，不同試劑盒的孵育時間、加樣量可能存在差異
所有試劑需按要求儲存，未用完的試劑需密封后放回規(guī)定溫度（通常2-8℃或-20℃）
避免試劑污染，不同組分的移液器槍頭需分開使用
洗板時需確保每孔都被洗滌液覆蓋，防止出現(xiàn)假陽性結(jié)果
顯色過程需避光，避免陽光直射影響結(jié)果
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實驗操作流程：
試劑平衡：試劑室溫平衡 22min，濃縮洗滌液稀釋 20 倍，組織勻漿樣本冰上放置至室溫。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：26S PSM 標(biāo)準(zhǔn)品溶解后梯度稀釋，6 個濃度梯度，設(shè)立空白孔。
加樣孵育：各孔 50μL 標(biāo)準(zhǔn)品 / 樣本，加入酶結(jié)合物 50μL，封膜 37℃避光孵育 62min。
洗板操作：棄液，洗滌液浸泡 32s，拍干，洗板 5 次。
底物顯色：底物 A、B 各 50μL 每孔，避光 37℃孵育 14min。
終止讀數(shù)：終止液混勻，9min 內(nèi)讀取 450nm 吸光度。
數(shù)據(jù)計算：標(biāo)準(zhǔn)曲線定量樣本內(nèi) 26S 蛋白酶體蛋白表達(dá)量。
關(guān)鍵字： 大鼠26S蛋白酶體;26S PSM;ELISA試劑盒;
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