雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附原理，微孔板預包被抗大鼠 Col Ⅱ 捕獲抗體，樣本軟骨特異性 Ⅱ 型膠原結合固相抗體，加入 HRP 標記檢測抗體形成夾心復合物，洗滌顯色后依據(jù)標準曲線定量 Col Ⅱ 濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測濃度0.3ng/mL，適配關節(jié)軟骨組織膠原檢測

檢測范圍：0.6ng/mL - 60ng/mL

反應時間：總時長90分鐘，樣本孵育60分鐘，二抗孵育30分鐘

保存條件：2-8℃避光冷藏，膠原抗體組分密封保存

有效期：原裝未拆封6個月有效

顯色系統(tǒng)：適配蛋白檢測的穩(wěn)定TMB顯色體系

檢測波長：450nm檢測，620nm參比校正

標準曲線繪制：6濃度梯度，四參數(shù)擬合，R2≥0.995

特異性：特異性結合大鼠Ⅱ型膠原，與Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原無交叉反應

重復性：板內CV≤5%，板間CV≤7%

注意事項：軟骨組織樣本充分裂解勻漿；避免蛋白高溫變性；洗滌徹底，去除雜質干擾
實驗前準備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標板、標準品、酶結合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標簽標注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標準品復溶 / 梯度稀釋：

凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品，單獨標記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復凍融。

待測樣本預處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴重樣本棄用。

2. 耗材與設備準備

設備：恒溫 37℃孵育箱、酶標儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準。

取出本次實驗所需酶標板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標記

酶標板做好分區(qū)標記：空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔（所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑平衡：試劑盒室溫靜置 27min，洗滌液稀釋 20 倍，關節(jié)軟骨勻漿樣本混勻。

標準品稀釋：ColⅡ 標準品復溶梯度稀釋 6 梯度，設立空白對照孔。

加樣孵育：各孔 50μL 標準品、樣本，酶結合物 50μL，37℃避光孵育 62min。

洗板操作：洗滌液浸泡 33s，拍干殘液，洗板 5 次。

底物顯色：底物 A、B 各 50μL，避光孵育 16min。

終止讀數(shù)：終止液混勻，9min 內讀取 450nm 吸光值。

數(shù)據(jù)計算：標準曲線定量軟骨 Ⅱ 型膠原表達量。