本試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)大鼠樣本中HMGB-1含量，將大鼠HMGB-1單克隆抗體包被于酶標(biāo)板，樣本中HMGB-1抗原與包被抗體特異性結(jié)合，再加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗形成免疫復(fù)合物，經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后，酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度，吸光度大小與樣本中HMGB-1濃度成正比，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)即可計(jì)算樣本抗原含量。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱(chēng) | 大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E1375 |
英文名稱(chēng) | HMGB-1 ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低檢測(cè)濃度≤10pg/mL
檢測(cè)范圍：25pg/mL - 800pg/mL
反應(yīng)時(shí)間：總反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)150分鐘（樣本溫育90分鐘、酶標(biāo)二抗溫育30分鐘、顯色30分鐘）
保存條件：2-8℃避光冷藏，嚴(yán)禁冷凍，濃縮洗滌液室溫保存，低溫結(jié)晶可溫水溶解后使用
有效期：未開(kāi)封有效期6個(gè)月，開(kāi)封后1個(gè)月內(nèi)用完
顯色系統(tǒng)：HRP催化TMB顯色體系，硫酸終止液終止反應(yīng)
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制：四參數(shù)擬合曲線(xiàn)，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度對(duì)應(yīng)吸光度值繪制，R2≥0.990
特異性：特異性結(jié)合大鼠HMGB-1蛋白，與HMGB家族其他蛋白無(wú)交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤7%，板間CV≤9%
注意事項(xiàng)：組織樣本需充分勻漿、離心取上清；避免樣本中蛋白酶干擾檢測(cè)；溫育全程密封防止孔板液體蒸發(fā)
關(guān)鍵注意事項(xiàng)：
實(shí)驗(yàn)前需仔細(xì)閱讀對(duì)應(yīng)試劑盒的說(shuō)明書(shū)，不同試劑盒的孵育時(shí)間、加樣量可能存在差異
所有試劑需按要求儲(chǔ)存，未用完的試劑需密封后放回規(guī)定溫度（通常2-8℃或-20℃）
避免試劑污染，不同組分的移液器槍頭需分開(kāi)使用
洗板時(shí)需確保每孔都被洗滌液覆蓋，防止出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果
顯色過(guò)程需避光，避免陽(yáng)光直射影響結(jié)果
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實(shí)驗(yàn)操作流程：
試劑室溫平衡 30min，復(fù)溶 HMGB-1 凍干標(biāo)準(zhǔn)品，用樣本稀釋液配制 6 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，劃分酶標(biāo)板孔類(lèi)型。
一步法直接上樣：標(biāo)準(zhǔn)孔加梯度標(biāo)準(zhǔn)品 100μL，待測(cè)孔加入大鼠組織勻漿上清 100μL，空白孔加純稀釋液。
密封酶標(biāo)板，37℃恒溫孵育 80min，完成固相抗體與 HMGB-1 抗原的特異性結(jié)合。
棄液洗板，每孔洗滌液浸潤(rùn) 40s 后棄去，重復(fù)洗板 6 次，充分洗去未結(jié)合雜蛋白。
全部檢測(cè)孔加入酶標(biāo)記抗體工作液 100μL，覆膜避光，37℃孵育 30min。
加入 TMB 顯色底物混合液 100μL，避光輕柔搖勻，37℃顯色 16min，直至標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)明顯由深到淺藍(lán)色梯度。
加入終止液終止顯色，450nm 波長(zhǎng)酶標(biāo)儀讀數(shù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣本 HMGB-1 表達(dá)量。
關(guān)鍵字： 大鼠高遷移率族蛋白B1;HMGB-1;ELISA試劑盒;
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