本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附法，針對(duì)大鼠睪酮建立高特異性檢測(cè)體系，酶標(biāo)板包被睪酮抗原，樣本中的內(nèi)源性睪酮與固相抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合特異性抗體，結(jié)合的酶標(biāo)抗體量與樣本睪酮含量負(fù)相關(guān)，底物顯色后檢測(cè)吸光度，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線可精準(zhǔn)測(cè)定大鼠樣本中睪酮的含量水平。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 大鼠睪酮(T)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E1613 |
英文名稱 | T ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低檢測(cè)濃度≤0.1ng/dL
檢測(cè)范圍：0.3ng/dL - 100ng/dL
反應(yīng)時(shí)間：總反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)120分鐘（抗原抗體結(jié)合60分鐘、酶反應(yīng)30分鐘、顯色30分鐘）
保存條件：2-8℃避光密封保存，標(biāo)準(zhǔn)品凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融
有效期：未開封有效期12個(gè)月，開封后組分2-8℃可保存1個(gè)月
顯色系統(tǒng)：TMB顯色體系，HRP酶促反應(yīng)顯色
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：四參數(shù)邏輯回歸擬合，標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合度R2≥0.995
特異性：特異性識(shí)別大鼠睪酮，與雌二醇、孕酮等性激素交叉反應(yīng)率＜2%
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤6%，板間CV≤8%
注意事項(xiàng)：血清樣本避免高脂、溶血；檢測(cè)前所有試劑恢復(fù)至室溫（20-25℃）；嚴(yán)格把控溫育溫度與時(shí)間
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
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實(shí)驗(yàn)操作流程：
試劑盒室溫回溫 32min，用稀釋液溶解睪酮標(biāo)準(zhǔn)品并做倍比梯度稀釋，區(qū)分酶標(biāo)板孔位組別。
一步直接加樣：標(biāo)準(zhǔn)孔加梯度睪酮標(biāo)準(zhǔn)液 100μL，待測(cè)孔加大鼠血清樣本 100μL，空白孔加稀釋緩沖液。
覆膜密封酶標(biāo)板，37℃恒溫孵育 75min，保證睪酮抗原與包被抗體充分結(jié)合。
棄凈孔中液體，洗滌液浸泡每孔 32s 后甩出廢液，連續(xù)洗板 5 次，吸水紙拍干。
所有樣品孔加入 HRP 酶標(biāo)記抗體工作液 100μL，避光封板，37℃孵育 32min。
加入顯色底物 AB 混合液 100μL，震蕩混勻，37℃避光顯色 17min。
加入終止液終止酶促反應(yīng)，酶標(biāo)儀 450nm 讀取吸光值，換算大鼠樣本睪酮濃度。
關(guān)鍵字： 大鼠睪酮;T;ELISA試劑盒;
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