本試劑盒采用間接酶聯(lián)免疫吸附法原理,酶標(biāo)板固相包被純化的大鼠抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)抗原,待測(cè)樣本中的抗AT-Ⅲ抗體可與固相抗原特異性結(jié)合,洗板后加入酶標(biāo)記特異性二抗,孵育結(jié)合后經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng),測(cè)定吸光度值,其數(shù)值與樣本中抗凝血酶Ⅲ抗體含量呈正相關(guān),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可定量檢測(cè)目標(biāo)抗體濃度。
基本參數(shù)?:

產(chǎn)品名稱:大鼠抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試劑盒
英文名稱:AT-Ⅲ ELISA Kit
貨號(hào):Y-E1391
規(guī)格:48T/96T
靈敏度:最低檢測(cè)靈敏度≤0.06ng/mL
檢測(cè)范圍:0.1ng/mL - 16ng/mL
反應(yīng)時(shí)間:總孵育反應(yīng)145分鐘
保存條件:2-8℃避光保存,凝血類試劑避免高溫、暴曬
有效期:原裝有效期10個(gè)月
顯色系統(tǒng):穩(wěn)定TMB顯色體系,終止后顏色穩(wěn)定30分鐘
檢測(cè)波長(zhǎng):450nm單一波長(zhǎng)檢測(cè)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:四參數(shù)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線,擬合度優(yōu)異
特異性:特異性識(shí)別大鼠抗凝血酶Ⅲ抗體,與凝血因子抗體無交叉反應(yīng)
重復(fù)性:板內(nèi)CV≤7%,板間CV≤8.8%
注意事項(xiàng):血漿樣本需規(guī)范抗凝,無凝血塊;樣本避免反復(fù)凍融破壞抗體結(jié)構(gòu)
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作:

1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分(酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液)從 2~8℃取出,室溫(20~25℃)放置平衡 30min,嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制:按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋(常見 20× 濃縮液:1 份濃縮液 + 19 份純水),混勻備用,現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋:
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解,室溫靜置 10min,輕柔吹打混勻;
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品,單獨(dú)標(biāo)記,剩余原液分裝 - 20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理:血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋,渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清;溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備:恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀(450nm 主波長(zhǎng),630nm 參比)、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)(或手動(dòng)洗板槽)、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染,移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條,剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋,加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記:空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔(所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差)。
實(shí)驗(yàn)步驟如下:

全部試劑室溫平衡 31min,按說明書稀釋濃縮洗滌緩沖液。
標(biāo)記酶標(biāo)板微孔類型,空白孔不加待測(cè)物,標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照、稀釋樣本與酶液共同加樣。
密封酶標(biāo)板,37℃孵育 67min。
洗板 5 次,每次浸泡 33s,濾紙吸干殘留洗液。
顯色液避光 37℃反應(yīng) 17min。
滴加終止液終止顯色,震蕩混勻。
450nm 檢測(cè)吸光度,標(biāo)準(zhǔn)曲線定量 AT-Ⅲ 抗體。
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