本試劑盒基于雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法原理，酶標(biāo)板包被大鼠sPECAM-1捕獲抗體，待測(cè)樣本中的sPECAM-1抗原與固相抗體特異性免疫結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后，加入HRP標(biāo)記檢測(cè)抗體構(gòu)建夾心復(fù)合物，顯色終止后測(cè)定吸光度，吸光度值與樣本sPECAM-1含量成正比，依托標(biāo)準(zhǔn)曲線完成定量檢測(cè)。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA試劑盒
英文名稱：sPECAM-1 ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E1401
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL
檢測(cè)范圍：4 pg/mL - 140 pg/mL
反應(yīng)時(shí)間：全程120分鐘（樣本孵育60min、酶標(biāo)孵育30min、顯色30min）
保存條件：2-8℃密封避光保存，嚴(yán)禁冷凍結(jié)冰
有效期：未開封12個(gè)月，開封后1個(gè)月內(nèi)用完
顯色系統(tǒng)：穩(wěn)定型TMB顯色體系，背景值極低，靈敏度高
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：七點(diǎn)梯度擬合，R2≥0.991
特異性：專一靶向大鼠sPECAM-1/sCD31，無(wú)同類粘附分子交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)CV＜7.5%，板間CV＜9.5%
注意事項(xiàng)：血小板聚集樣本需充分離心取上清；顯色時(shí)間精準(zhǔn)控制，過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致背景升高；實(shí)驗(yàn)耗材需無(wú)菌無(wú)雜質(zhì)。
通用注意事項(xiàng)：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過(guò)低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見(jiàn)光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對(duì)照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說(shuō)明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲(chǔ)存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑室溫回溫 26min，稀釋洗滌緩沖液，調(diào)配酶應(yīng)用液。
標(biāo)記各孔用途，空白孔加稀釋緩沖液，標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照、待測(cè)稀釋樣本與酶試劑一同加入對(duì)應(yīng)微孔。
封板 37℃孵育 62min。
洗板 5 次，浸泡 28s 每次，濾紙拍干板孔。
顯色 AB 液避光反應(yīng) 13min。
滴加終止液終止酶促顯色。
酶標(biāo)儀 450nm 檢測(cè)數(shù)據(jù)，同步測(cè)定 sPECAM-1 與 sCD31 兩項(xiàng)指標(biāo)。
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關(guān)鍵字： 大鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1;sPECAM-1/sCD31;ELISA試劑盒;
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