本試劑盒依托雙抗體夾心ELISA技術原理,以包被在酶標板上的大鼠AMPK特異性抗體為固相載體,結合樣本及標準品中的AMPK抗原,再加入酶標記二抗形成穩(wěn)定的免疫復合物,洗滌去除非特異性結合物后,底物在酶的催化下發(fā)生顯色反應,終止顯色后測定吸光度,根據(jù)標準曲線的線性關系,精準定量大鼠樣本中磷酸化AMPK的含量。
基本參數(shù)?:

產(chǎn)品名稱:大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA試劑盒
英文名稱:AMPK ELISA Kit
貨號:Y-E1057
規(guī)格:48T/96T
靈敏度:最低檢測濃度≤0.1ng/mL
檢測范圍:0.3ng/mL - 10ng/mL
反應時間:總反應時長140min,分步溫育、洗滌、顯色
保存條件:試劑盒2-8℃保存,濃縮試劑使用前平衡至室溫,剩余試劑密封避光
有效期:未開封有效期6個月
顯色系統(tǒng):TMB-H2O2顯色系統(tǒng),硫酸溶液終止顯色
檢測波長:450nm波長檢測
標準曲線繪制:標準品梯度稀釋,測定吸光度,四參數(shù)擬合曲線,用于樣本定量分析
特異性:特異性識別大鼠磷酸化AMPK,與非磷酸化AMPK及同源激酶無交叉反應
重復性:板內(nèi)CV<7.5%,板間CV<9.5%
注意事項:樣本需低溫離心處理,避免蛋白降解;所有試劑避免反復凍融;實驗耗材無酶無污染,保證檢測準確性
關鍵注意事項:

實驗前需仔細閱讀對應試劑盒的說明書,不同試劑盒的孵育時間、加樣量可能存在差異
所有試劑需按要求儲存,未用完的試劑需密封后放回規(guī)定溫度(通常2-8℃或-20℃)
避免試劑污染,不同組分的移液器槍頭需分開使用
洗板時需確保每孔都被洗滌液覆蓋,防止出現(xiàn)假陽性結果
顯色過程需避光,避免陽光直射影響結果
實驗步驟如下:

預包被板各孔添加標準品梯度液 50μL,待測血清樣本 50μL,空白孔僅加稀釋液,做好孔位標記。
每孔加入酶標記二抗工作液 100μL,覆膜封口,37℃恒溫孵育 60min。
傾倒孔內(nèi)廢液,每孔灌滿洗滌液靜置 35s,用力拍板吸干,重復洗板 4 次。
避光添加顯色底物 A、B 液各 50μL,混勻后室溫暗處顯色 20min。
每孔加入終止溶液 50μL,終止顯色,水平搖晃微孔板使液體混合均勻。
酶標儀選擇 450nm 波長檢測吸光值,錄入所有孔位讀數(shù)。
根據(jù)標準曲線計算樣本 AMPK 磷酸化蛋白濃度,實驗數(shù)據(jù)剔除明顯異常離群值。
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關鍵字: 大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶;AMPK;ELISA試劑盒;
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