本試劑盒基于雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，預先將大鼠TRAIL-R1特異性抗體包被于酶標板微孔內。實驗孵育階段，樣本、標準品中的大鼠TRAIL-R1抗原與固相抗體特異性結合，洗滌去除未結合組分后，加入HRP標記的TRAIL-R1檢測抗體，構建特異性免疫復合物。后續(xù)通過TMB底物催化顯色，有色產物的吸光度與樣本中TRAIL-R1含量成正比，終止反應后檢測吸光度，對照標準曲線即可定量檢測目標蛋白濃度。
產品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測濃度≤3.0pg/mL

檢測范圍：6pg/mL - 200pg/mL

反應時間：總反應120分鐘（孵育60min、酶孵育30min、顯色30min）

保存條件：2-8℃冷藏避光，嚴禁冷凍

有效期：12個月

檢測波長：450nm

標準曲線繪制：四參數(shù)Logistic擬合，R2≥0.990

注意事項：凋亡相關樣本需及時處理，避免蛋白降解，保證檢測準確性
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結合物、神經遞質 / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。

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實驗操作流程：

1. 試劑盒全部組分室溫放置 30min，配制 1× 洗滌緩沖液，組織上清樣本離心去除沉淀，拆分酶標條。

2. 標準品孔加入梯度 TRAIL-R1 標準品 50μL，樣本孔加入 50μL 待測上清，空白孔加稀釋液。

3. 每孔加入酶標記結合液 100μL，封板密封，混勻后 37℃孵育 61min。

4. 棄凈孔內液體，洗板 5 輪，每輪浸泡 30s，倒扣拍干微孔。

5. 避光依次添加顯色 A、B 液各 50μL，37℃避光顯色 13min。

6. 加入終止液 50μL / 孔，搖晃酶標板終止反應。

7. 酶標儀 450nm 檢測，擬合標準曲線測算 TRAIL-R1 含量。