本試劑盒采用競爭法酶聯(lián)免疫吸附檢測原理,酶標板微孔預先包被大鼠組胺特異性抗原。孵育時,待測樣本中的組胺與微孔固相抗原競爭結(jié)合HRP標記的組胺特異性抗體,樣本中組胺濃度越高,固相載體結(jié)合的酶標抗體含量越低。洗板去除未結(jié)合抗體后,加入TMB底物進行顯色反應(yīng),顯色強度與樣本中組胺含量呈負相關(guān),終止反應(yīng)后檢測吸光度數(shù)值,通過標準曲線回歸計算,可精準測定大鼠樣本中組胺的濃度。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱 | 大鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒 | 貨號 | Y-E1480 |
英文名稱 | HIS ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度:最低檢測濃度≤5.0pg/mL
檢測范圍:10pg/mL - 500pg/mL
反應(yīng)時間:總反應(yīng)120分鐘(孵育60min、酶孵育30min、顯色30min)
保存條件:2-8℃避光冷藏,組胺試劑易降解,需密封嚴實
有效期:12個月
檢測波長:450nm
標準曲線繪制:四參數(shù)擬合標準曲線,R2≥0.990
注意事項:樣本采集后快速低溫保存,避免組胺降解,實驗全程避光
關(guān)鍵注意事項:
本試劑盒僅科研體外檢測,嚴禁臨床診斷使用。
全程避免試劑、板條強光直射,TMB 見光易失效。
移液器吸頭一次性使用,杜絕交叉污染;所有操作無酶、無熱源。
孵育溫度嚴格控制 37℃,溫度偏低會降低 OD 值、靈敏度下降。
洗板必須充分,殘液會造成非特異性結(jié)合,背景偏高。
終止后需快速讀數(shù),放置過久吸光度會漂移,結(jié)果失真。
終止液含稀硫酸,避免接觸皮膚、眼睛,若不慎接觸大量清水沖洗。
實驗廢棄物按生物安全廢棄物規(guī)范處理。
不同批次試劑盒組分不可混用。
試劑盒運輸全程 2~8℃冷鏈,嚴禁高溫暴曬。
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實驗操作流程:
1. 試劑盒所有試劑室溫平衡 30min,配制 1× 洗滌液,待測樣本避光低溫預處理后離心取上清,劃分酶標板孔組。
2. 標準品孔加入系列稀釋組胺標準品 50μL,樣本孔加入 50μL 待測上清,空白孔添加稀釋緩沖液。
3. 各孔加入酶偶聯(lián)工作液 100μL,封板膜密封,混勻后 37℃孵育 68min。
4. 棄凈孔內(nèi)液體,洗板 4 次,單次浸泡 30s,吸水紙徹底拍干板孔。
5. 避光添加顯色 A、B 液各 50μL,37℃避光顯色 12min。
6. 每孔加入終止液 50μL 終止顯色,充分搖晃混勻。
7. 酶標儀 450nm 讀數(shù),擬合標準曲線測定組胺含量。
關(guān)鍵字: 大鼠組胺;HIS;ELISA試劑盒;
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