本試劑盒基于間接ELISA檢測原理，將純化的人A組鏈球菌菌壁多糖抗原包被在酶標(biāo)板上，樣本中存在的ASP可與固相抗原特異性結(jié)合，隨后加入酶標(biāo)記的抗人IgG抗體并與之結(jié)合，洗板去除未結(jié)合雜質(zhì)后，經(jīng)底物催化顯色、終止反應(yīng)步驟，通過檢測吸光度數(shù)值，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線定量檢測樣本中人A組鏈球菌菌壁多糖抗體的濃度。
基本參數(shù)?：

產(chǎn)品名稱：人A組鏈球菌菌壁多糖抗體(ASP)ELISA試劑盒

英文名稱：ASP ELISA Kit
貨號：Y-E2685

規(guī)格：48T/96T

靈敏度：最低檢出限0.5U/mL，可靈敏捕捉低濃度ASP抗體表達(dá)變化

檢測范圍：1U/mL - 32U/mL，適配臨床血清、血漿樣本中ASP抗體檢測需求

反應(yīng)時間：分步反應(yīng)總時長120分鐘，抗原抗體結(jié)合充分，保障檢測準(zhǔn)確度

保存條件：全套試劑2-8℃恒溫冷藏，洗板液室溫密封保存即可

有效期：原裝未拆封有效期12個月，開封后試劑需密封冷藏，2周內(nèi)使用完畢

特異性：專一結(jié)合人A組鏈球菌菌壁多糖抗體，與其他菌群抗體、人體正常免疫球蛋白無交叉反應(yīng)

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤5%，板間CV≤7%，批間、批內(nèi)檢測差異小

注意事項：血清樣本需離心去除溶血、脂血雜質(zhì)，孵育溫度需恒定37℃，洗板步驟需徹底避免殘留雜質(zhì)影響結(jié)果
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實驗步驟如下：

試劑盒組分室溫回溫 25min，按說明書比例稀釋濃縮洗滌液配制成工作洗滌液，梯度稀釋 ASP 標(biāo)準(zhǔn)品，設(shè)置酶標(biāo)板標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣本孔、空白孔并編號區(qū)分。

標(biāo)準(zhǔn)品孔依次加入 50μL 不同濃度 ASP 標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔添加 50μL 離心澄清后的待測體液樣本，空白孔添加 50μL 樣本稀釋液，加樣過程槍頭不觸碰孔底固相包被層。

所有孔一次性加入 100μL 一步法酶標(biāo)記抗體混合工作液，封板膜嚴(yán)實封板，37℃避光水浴孵育 45min，保證反應(yīng)體系穩(wěn)定結(jié)合。

棄去孔中反應(yīng)液，每孔注滿洗滌液浸泡 35s 后棄液，連續(xù)洗板 4 次，最后一次洗板后倒扣酶標(biāo)板于吸水紙徹底拍干殘留洗液。

每孔加入 TMB 顯色液 100μL，避光 37℃孵育顯色 12min，嚴(yán)禁強光直射酶標(biāo)板防止底物提前氧化失效。

按順序每孔加入 50μL 硫酸終止液，輕微震蕩酶標(biāo)板使孔內(nèi)液體充分混勻，立刻終止顯色反應(yīng)。

酶標(biāo)儀 450nm 波長測定各孔吸光值，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，代入樣本 OD 值換算得出樣本 ASP 抗體含量。
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