本試劑盒依托雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附原理，固相酶標(biāo)板固定人S100A9特異性捕獲抗體，加入梯度標(biāo)準(zhǔn)品和待測生物樣本，樣本中的S100鈣結(jié)合蛋白A9與固相抗體特異性結(jié)合，孵育洗滌后加入HRP標(biāo)記的S100A9檢測抗體，形成夾心免疫復(fù)合物，經(jīng)顯色、終止反應(yīng)后檢測吸光度，定量測定樣本中S100A9的表達(dá)水平。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人S100鈣結(jié)合蛋白A9/鈣粒蛋白B(S100A9)ELISA試劑盒
英文名稱：S100A9 Elisa Kit
貨號：Y-E538
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測值≤2.5pg/mL，精準(zhǔn)捕捉樣本中微量S100A9表達(dá)變化
檢測范圍：20-1200pg/mL，覆蓋炎癥、氧化應(yīng)激相關(guān)樣本濃度區(qū)間
反應(yīng)時間：全程反應(yīng)時長2.7h，抗原抗體結(jié)合充分，檢測結(jié)果準(zhǔn)確
保存條件：2-8℃避光密封保存，所有試劑禁止凍存，復(fù)溶標(biāo)準(zhǔn)品短期保存需密封防污染
有效期：未開封有效期6個月，儲存不當(dāng)會導(dǎo)致靈敏度下降、背景升高
特異性：專一性結(jié)合人S100A9蛋白，與S100A8、S100B等同家族蛋白無明顯交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)＜9%，板間變異系數(shù)＜11%，重復(fù)性滿足科研實(shí)驗(yàn)要求
注意事項(xiàng)：樣本采集后及時分離上清，避免細(xì)胞雜質(zhì)殘留影響檢測；標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋需精準(zhǔn)，保證標(biāo)準(zhǔn)曲線R2≥0.99；孵育過程禁止晃動酶標(biāo)板，防止液體濺出、孔間交叉污染；過期試劑嚴(yán)禁使用；實(shí)驗(yàn)耗材一次性使用，避免交叉污染
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑室溫放置 31min 回溫，稀釋洗滌液，凍干標(biāo)準(zhǔn)品溶解靜置 11min 后倍比稀釋，標(biāo)記酶標(biāo)板孔位。
空白對照孔添加稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)孔依次加入梯度標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔加入離心后待測上清樣本。
直接向全部微孔加入酶標(biāo)記抗體工作液，輕搖混勻，封板嚴(yán)密封口。
37℃避光孵育 67min，保持酶標(biāo)板平放無傾斜。
撕掉封板倒凈廢液，洗滌液浸泡微孔 37s，洗板 5 次后充分拍干微孔。
加入顯色底物，避光 37℃顯色 16min，梯度顯色無異常。
終止液終止反應(yīng)，450nm 檢測吸光值，換算樣本 S100A9 濃度。
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關(guān)鍵字： 人S100鈣結(jié)合蛋白A9/鈣粒蛋白B;S100A9;ELISA試劑盒;
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