本試劑盒依托雙抗體夾心ELISA檢測原理，微孔板表面包被人α1抗胰糜蛋白酶（AACT）特異性特異性抗體，孵育時(shí)樣本中的AACT抗原與固相抗體發(fā)生特異性免疫結(jié)合，洗板去除未結(jié)合組分后，加入HRP標(biāo)記的AACT檢測抗體形成穩(wěn)定免疫復(fù)合物，洗滌純化后加入顯色底物觸發(fā)酶促顯色反應(yīng)，終止反應(yīng)后通過酶標(biāo)儀測定吸光度，吸光度數(shù)值可精準(zhǔn)反映樣本中AACT的濃度水平。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人α1抗胰糜蛋白酶(AACT)ELISA試劑盒
英文名稱：AACT Elisa Kit
貨號(hào)：Y-E337
規(guī)格：48T/96T
1.靈敏度：最小可測≤0.22μg/mL
2.檢測范圍：0.45μg/mL - 14.4μg/mL
3.反應(yīng)時(shí)間：捕獲孵育 88min，酶結(jié)合物 45min，顯色 17min
4.顯色系統(tǒng)：預(yù)混一體式 TMB 顯色液
5.檢測波長：450nm
6.特異性：專一靶向人 AACT，與 α1-AT 無明顯交叉免疫反應(yīng)
7.重復(fù)性：板內(nèi) CV＜7.3%，板間 CV＜10%
8.注意事項(xiàng)：微孔板未使用條板需放入鋁箔袋密封冷藏防潮
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
1. 試劑與樣本室溫靜置 29min，配制洗滌工作液，標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋，雜質(zhì)樣本離心 5min 取上清。
2. 標(biāo)記酶標(biāo)板孔位，標(biāo)準(zhǔn)品孔加入對(duì)應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣本孔加入上清待測液 50μL，空白孔空置。
3. 除空白孔外每孔添加酶標(biāo)記二抗 100μL，封板膜封口，小幅晃動(dòng)酶標(biāo)板混勻。
4. 37℃密閉孵育 58min，孵育箱溫度恒定無偏差。
5. 倒掉孔內(nèi)反應(yīng)液，洗滌液浸泡 29s 甩干，循環(huán)洗板 4 次，去除非特異性吸附雜質(zhì)。
6. 避光依次加入顯色 A、B 液各 50μL，震蕩混勻，37℃避光顯色 17min。
7. 加入終止液終止酶促反應(yīng)，酶標(biāo)儀讀數(shù)，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量 AACT 蛋白濃度。
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關(guān)鍵字： 人α1抗胰糜蛋白酶;AACT;ELISA試劑盒;
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