本試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心ELISA技術(shù)檢測人樣本中的阿黑皮素原(POMC)水平。微孔板固相載體包被POMC特異性捕獲抗體，加入待測樣本后，樣本中的POMC抗原與固相抗體特異性結(jié)合，經(jīng)洗滌去除未結(jié)合雜質(zhì)。隨后加入HRP標(biāo)記的POMC檢測抗體，形成固相抗體-POMC抗原-酶標(biāo)抗體夾心復(fù)合物，再次洗滌后加入TMB底物顯色，酶催化底物發(fā)生氧化反應(yīng)生成藍(lán)色顯色物，終止反應(yīng)后轉(zhuǎn)為黃色。酶標(biāo)儀檢測450nm吸光度值，吸光度與樣本中POMC濃度呈正比例關(guān)系，依托標(biāo)準(zhǔn)曲線可精準(zhǔn)定量POMC含量。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 人阿黑皮素原(POMC)ELISA試劑盒 | 貨號 | Y-E2671 |
英文名稱 | POMC ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：≤15pg/mL
檢測范圍：50pg/mL–2500pg/mL
反應(yīng)時間：室溫樣本孵育 90min，酶結(jié)合物孵育 60min，顯色 15min
顯色系統(tǒng)：HRP-TMB 顯色
檢測波長：450nm，參考 620nm
特異性：可特異性識別人 POMC 前體蛋白，不識別其剪切后單肽片段
重復(fù)性：板內(nèi) CV≤5%，板間 CV≤7%
注意事項：血漿樣本需添加蛋白酶抑制劑，防止 POMC 被降解
試劑盒組成：
預(yù)包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原，結(jié)合目標(biāo)物
標(biāo)準(zhǔn)品 6支/套 制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量檢測依據(jù)
生物素標(biāo)記抗體/抗原 1瓶 識別并結(jié)合目標(biāo)物，提供酶結(jié)合位點
辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記親和素 1瓶 與生物素結(jié)合，催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應(yīng)底物，產(chǎn)生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應(yīng)，穩(wěn)定顯色結(jié)果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板，去除未結(jié)合物質(zhì)
封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)
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實驗操作流程：
試劑盒室溫平衡 28min，取出酶標(biāo)板，根據(jù)樣本數(shù)量截取對應(yīng)板條，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)孔、樣品孔、空白對照孔。
標(biāo)準(zhǔn)品孔加入系列稀釋 POMC 標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；待測孔加入經(jīng)離心過濾處理的體液樣本 50μL；空白孔不加試劑。
向所有非空白孔加入一步法一抗酶偶聯(lián)工作液 50μL，輕晃酶標(biāo)板混勻，封膜封口。
37℃恒溫孵育 65min，孵育過程中酶標(biāo)板平放無傾斜。
棄除孔內(nèi)液體，洗板液填充微孔，靜置 30s 后拍干，重復(fù)洗板 5 次，保證孔底無游離未結(jié)合物質(zhì)。
每孔加入顯色 A 液、B 液各 50μL，避光混勻，37℃暗處顯色 16min。
加入終止液 50μL 混勻終止反應(yīng)，酶標(biāo)儀 450nm 讀值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本 POMC 含量。
關(guān)鍵字： 人阿黑皮素原;POMC;ELISA試劑盒;
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