本試劑盒采用間接ELISA法檢測(cè)人樣本中阿米巴(Amebiasis)特異性抗體。微孔板固相包被純化的阿米巴抗原，加入待測(cè)人樣本后，樣本中針對(duì)阿米巴的特異性抗體與固相抗原發(fā)生特異性結(jié)合，洗去未結(jié)合的無關(guān)抗體及雜質(zhì)。隨后加入HRP標(biāo)記的抗人IgG二抗，特異性結(jié)合樣本中已吸附的抗體，再次洗滌后加入TMB底物顯色，酶促反應(yīng)產(chǎn)生有色產(chǎn)物，終止反應(yīng)后檢測(cè)吸光度。樣本中阿米巴抗體含量越高，顯色越深，吸光度值越高，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線可定性、定量判斷阿米巴感染相關(guān)抗體水平。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：陽性檢出下限滴度 1:40

檢測(cè)范圍：血清抗體滴度 1:40~1:2560

反應(yīng)時(shí)間：樣本溫育 65min，酶標(biāo)二抗 35min，顯色 15min

顯色系統(tǒng)：OPD 顯色體系

檢測(cè)波長(zhǎng)：490nm

特異性：無弓形蟲、瘧原蟲抗體交叉陽性

重復(fù)性：板內(nèi) CV＜7.5%，板間 CV＜9.5%

注意事項(xiàng)：用于血清抗體篩查，急性期與恢復(fù)期雙份血清比對(duì)結(jié)果更準(zhǔn)確
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：

凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。

2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備

設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。

取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記

酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

整套試劑盒室溫平衡 35min，取出預(yù)包被酶標(biāo)板，拆分所需板條，標(biāo)記標(biāo)準(zhǔn)孔、樣本孔、空白孔。

標(biāo)準(zhǔn)孔加入梯度稀釋阿米巴抗原標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；樣本孔加入患者血清稀釋樣本 50μL；空白孔不加試劑。

非空白孔加入一步法酶標(biāo)記檢測(cè)抗體工作液 50μL，輕柔搖晃酶板混勻，密封封板膜。

37℃恒溫避光孵育 75min，避免環(huán)境溫差干擾結(jié)合反應(yīng)。

傾倒廢液，洗板液加滿微孔浸泡 40s，吸水紙拍干，重復(fù)洗板 6 次。

每孔依次添加顯色液 A、B 各 50μL，避光混勻，37℃避光顯色 20min。

加入終止液 50μL 終止反應(yīng)，充分混勻，酶標(biāo)儀 450nm 讀數(shù)，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線判定樣本阿米巴相關(guān)指標(biāo)濃度。