本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA檢測(cè)原理測(cè)定樣本中人表面膜免疫球蛋白A(mIgA)含量。酶標(biāo)板預(yù)先包被mIgA特異性單克隆捕獲抗體，加入待測(cè)樣本與標(biāo)準(zhǔn)品孵育，樣本中的mIgA與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌純化后加入配套酶標(biāo)檢測(cè)抗體，形成夾心免疫復(fù)合物，底物發(fā)生酶促顯色反應(yīng)，吸光度值與樣本中mIgA濃度成正比，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可精準(zhǔn)定量目標(biāo)免疫球蛋白含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：0.15μg/mL

檢測(cè)范圍：0.3μg/mL～19.2μg/mL

反應(yīng)時(shí)間：細(xì)胞裂解樣本孵育 58min，二抗 42min，顯色 21min

顯色系統(tǒng)：HRP-TMB 顯色系統(tǒng)

檢測(cè)波長：450nm，570nm 校正本底

特異性：僅識(shí)別細(xì)胞膜結(jié)合型 IgA，游離分泌型 sIgA 交叉反應(yīng)＜4%

重復(fù)性：板內(nèi) CV≤7.0%，板間 CV≤10.0%

注意事項(xiàng)：細(xì)胞樣本裂解后不可高溫放置，避免膜蛋白降解失效
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：

凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。

2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備

設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。

取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記

酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

細(xì)胞裂解預(yù)處理樣本與梯度標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)記抗體同步加至包被板，封板 37℃孵育 52min，洗板 4 次。

洗滌液灌滿微孔靜置 35s 倒掉廢液，重復(fù)洗滌步驟，倒扣拍干微孔。

加入顯色底物避光顯色 16min。

加入終止液終止酶促顯色反應(yīng)，混勻液體。

酶標(biāo)儀 450nm 讀取 OD 吸光值。

擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算對(duì)應(yīng)濃度參數(shù)。

校正樣本稀釋比例，得到 mIgA 最終檢測(cè)濃度。