本試劑盒依托雙抗體夾心ELISA原理檢測樣本中人玻連蛋白(VN)含量。試劑盒固相載體預固定VN特異性捕獲抗體，孵育后樣本中的VN抗原與固相抗體特異性識別結合，洗滌純化后加入酶標檢測抗體形成免疫夾心復合物，酶催化底物發(fā)生顯色反應，吸光度數(shù)值與樣本中VN濃度呈正相關，通過標準曲線擬合可精準定量目標蛋白水平。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：0.1ng/mL

檢測范圍：0.2ng/mL～12.9ng/mL

反應時間：包被捕獲 73min，酶標二抗 29min，顯色 17min

顯色系統(tǒng)：A/B 雙液配比 TMB 顯色體系

檢測波長：450nm

特異性：完整識別 VN 蛋白及 CD51/CD61 復合物，纖連蛋白無交叉反應

重復性：板內(nèi) CV＜6.7%，板間 CV＜9.7%

注意事項：血漿樣本需添加抗凝劑，不可使用肝素過量標本避免蛋白結合干擾
實驗前準備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標板、標準品、酶結合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標簽標注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標準品復溶 / 梯度稀釋：

凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品，單獨標記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復凍融。

待測樣本預處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴重樣本棄用。

2. 耗材與設備準備

設備：恒溫 37℃孵育箱、酶標儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準。

取出本次實驗所需酶標板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標記

酶標板做好分區(qū)標記：空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔（所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

微孔板加入梯度標準品、血漿待測樣本、生物素化一抗，封板 37℃孵育 65min，洗板 5 次。

洗滌液洗板浸泡 20s 棄廢液，多次洗滌后吸干微孔。

加入 HRP 標記親和素避光孵育 27min，再次洗板 6 次。

加入顯色底物避光反應 13min，終止液終止顯色。

酶標儀 450nm 讀取每孔 OD 數(shù)值。

擬合標準曲線得到定量公式。

計算樣本 VN 蛋白含量，校正稀釋倍數(shù)后確定最終結果。