人鈣離子通道抗體(VGCC)ELISA試劑盒:本試劑盒采用間接ELISA檢測(cè)原理,將純化的人鈣離子通道抗原包被于酶標(biāo)板微孔,樣本中存在的VGCC抗體可與固相抗原特異性結(jié)合,再加入酶標(biāo)記的抗人IgG抗體與樣本抗體結(jié)合,洗滌去除多余反應(yīng)物后,加入底物顯色,顯色強(qiáng)度與樣本中鈣離子通道抗體含量成正比,通過(guò)測(cè)定吸光度并對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),可定量檢測(cè)樣本中人鈣離子通道抗體的水平。
基本參數(shù)?:

產(chǎn)品名稱(chēng):人鈣離子通道抗體(VGCC)ELISA試劑盒
英文名稱(chēng):VGCC ELISA Kit
貨號(hào):Y-E2667
規(guī)格:48T/96T
靈敏度:最低檢出 0.1AU/mL
檢測(cè)范圍:0.3AU/mL~19.2AU/mL
反應(yīng)時(shí)間:37℃孵育 80min,二抗孵育 40min,顯色 16min
顯色系統(tǒng):?jiǎn)我盒?/span> TMB 顯色液
檢測(cè)波長(zhǎng):450nm+630nm 雙波長(zhǎng)
特異性:特異性識(shí)別電壓門(mén)控鈣離子通道自身抗體,不結(jié)合其他離子通道抗體
重復(fù)性:批內(nèi) CV<9%,批間 CV<11.5%
注意事項(xiàng):自身免疫樣本建議新鮮檢測(cè);洗滌液出現(xiàn)渾濁禁止使用
通用注意事項(xiàng):

樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸;組織勻漿充分離心去除沉淀;樣本分裝凍存,反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解,檢測(cè)值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃,溫箱溫度波動(dòng)、室溫過(guò)低會(huì)降低結(jié)合效率,背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類(lèi)靶標(biāo)樣本見(jiàn)光易氧化,顯色全程避光,試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性;拍干時(shí)使用干凈吸水紙,禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶;槍頭一次性更換,標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣;底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸,具有腐蝕性,避免接觸皮膚、黏膜;實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理,不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異,均判定失效,禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí),必須稀釋重測(cè),最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù);低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對(duì)照
空白孔吸光度應(yīng)極低,若空白孔 OD>0.1,說(shuō)明洗滌不充分或試劑污染,實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲(chǔ)存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰,冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性,直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下:

整套試劑盒室溫平衡 32min,配制不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品,微孔板劃分實(shí)驗(yàn)孔,每孔加入樣本或標(biāo)品 48μL,空白孔不添加試劑。
各孔加入酶聯(lián)反應(yīng)工作液 102μL,封板膜密封板條,橫向晃動(dòng)混勻反應(yīng)體系。
37℃避光水浴孵育 62min,禁止陽(yáng)光直射微孔板。
撕除封板膜,倒掉孔內(nèi)液體,洗板液浸泡每孔 45s,連續(xù)洗板 4 次,倒扣拍干所有液體。
每孔加入顯色液 A 50μL、顯色液 B 50μL,37℃避光顯色 13min。
滴入終止液 50μL,震蕩混勻終止顯色。
酶標(biāo)儀 450nm 測(cè)定 OD 值,擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定量 VGCC 抗體水平。
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