本試劑盒運用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附技術，酶標板包被抗人干擾素調(diào)節(jié)因子特異性抗體，樣本中的IRF抗原可與固相抗體特異性結(jié)合，疊加酶標記二抗形成穩(wěn)定夾心復合物，洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后催化底物顯色，顯色強度隨IRF濃度升高而增強，依托標準曲線可完成樣本中IRF的定量檢測。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低可測 2.1ng/L

檢測范圍：7ng/L～224ng/L

反應時間：37℃結(jié)合 60min，二抗 50min，顯色 17min

顯色系統(tǒng)：雙組份 TMB 顯色體系

檢測波長：450nm+630nm

特異性：特異性結(jié)合 IRF 家族保守 DNA 結(jié)合區(qū)，無其他轉(zhuǎn)錄因子交叉反應

重復性：批內(nèi) CV＜7.7%，批間 CV＜9.9%

注意事項：核蛋白樣本避免核酸污染；洗板每孔洗滌液加注量不少于 300μL
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

整套試劑盒室溫放置 30min，梯度稀釋標準品，微孔板編號分組，每孔上樣 50μL，空白孔不加任何液體。

全部孔位加入一步法酶標記抗體液 100μL，封板密封，上下輕拍酶標板混勻。

37℃恒溫避光孵育 62min，酶標板單層平放孵育。

傾倒孔內(nèi)廢液，洗板液浸泡微孔 35s，洗板 5 次，倒扣板條拍干余液。

依次添加顯色 A 液、B 液各 50μL，37℃避光顯色 17min。

逐孔加注終止液 50μL 混勻終止酶促反應。

15min 內(nèi) 450nm 讀板，標準曲線法定量干擾素調(diào)節(jié)因子濃度。