本試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）間接法檢測人冠狀病毒IgG（Coronaviruses IgG）含量，預(yù)先將純化的人冠狀病毒抗原包被于微孔板孔底，加入待測樣本后，樣本中特異性冠狀病毒IgG抗體可與固相抗原特異性結(jié)合，洗去未結(jié)合雜質(zhì)后，加入酶標(biāo)記的二抗與結(jié)合的人體IgG抗體結(jié)合，再次洗滌后加入底物顯色液發(fā)生顯色反應(yīng)，最后加入終止液終止反應(yīng)，通過酶標(biāo)儀測定各孔吸光度值，吸光度值與樣本中人冠狀病毒IgG含量呈正相關(guān)，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可精準(zhǔn)計算樣本中目標(biāo)抗體的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低可檢出 1.2ng/mL 樣本中冠狀病毒 IgG 抗體

檢測范圍：0.5ng/mL～80ng/mL

反應(yīng)時間：樣本孵育 60min，二抗孵育 30min，整體操作 135min

顯色系統(tǒng)：TMB 單組份顯色液，終止液 2M 濃硫酸

檢測波長：主波長 450nm，參比波長 630nm

特異性：僅與人冠狀病毒 IgG 特異性結(jié)合，與流感、呼吸道合胞病毒無交叉反應(yīng)

重復(fù)性：板內(nèi) CV＜7%，板間 CV＜10%

注意事項：血清樣本需室溫靜置 30min 分離，溶血樣本嚴(yán)禁使用
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：

凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。

2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備

設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。

取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記

酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

試劑盒室溫平衡 30min，配置洗滌液、樣本稀釋液、酶結(jié)合工作液，取出預(yù)包被板條固定于板架。

設(shè)置空白孔、陰性對照孔、陽性對照孔、待測樣本孔，每孔依次加入對應(yīng)稀釋后樣本、陰陽性對照品、空白稀釋液。

每孔直接加入酶標(biāo)記二抗工作液，封板膜封嚴(yán)反應(yīng)板，室溫避光孵育 60min。

揭去封板膜，棄凈孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液靜置 30s 后甩干，重復(fù)洗板 5 次，最后一次拍干孔內(nèi)殘余液體。

每孔等量加入顯色底物 A 液與 B 液，輕柔震蕩混勻，室溫避光顯色 15min。

按順序快速加入終止液終止酶促顯色反應(yīng)，輕晃酶標(biāo)板混勻。

酶標(biāo)儀設(shè)定 450nm 波長，測定各孔 OD 吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品曲線計算樣本 Coronaviruses IgG 濃度。