本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法，固相載體包被MLC特異性捕獲抗體，待測樣本中的肌球蛋白輕鏈可與固相抗體發(fā)生特異性免疫結(jié)合，孵育結(jié)合后加入酶標(biāo)記MLC檢測抗體，形成穩(wěn)定的夾心免疫復(fù)合物，充分洗滌洗除未結(jié)合雜質(zhì)后，加入底物發(fā)生酶促顯色反應(yīng)，有色產(chǎn)物的吸光度值與樣本中MLC濃度呈正相關(guān)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合計算，可定量檢測樣本中MLC的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 人肌球蛋白輕鏈(MLC)ELISA試劑盒 | 貨號 | Y-E2545 |
英文名稱 | MLC ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：≤0.1ng/mL
檢測范圍：0.25ng/mL~8ng/mL
反應(yīng)時間：37℃樣本孵育 65min；酶結(jié)合物 40min；避光顯色 10min
保存條件：2~8℃避光保存，嚴禁冷凍凍裂試劑瓶；失效試劑不可混用
顯色系統(tǒng)：TMB 底物顯色體系
檢測波長：450nm/630nm 雙波長
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：7 點標(biāo)準(zhǔn)品梯度，四參數(shù)法繪制曲線，復(fù)孔檢測取均值計算
注意事項：心肌組織勻漿樣本需充分離心去除沉淀；操作佩戴一次性手套防止蛋白污染
關(guān)鍵注意事項：
本試劑盒僅科研體外檢測，嚴禁臨床診斷使用。
全程避免試劑、板條強光直射，TMB 見光易失效。
移液器吸頭一次性使用，杜絕交叉污染；所有操作無酶、無熱源。
孵育溫度嚴格控制 37℃，溫度偏低會降低 OD 值、靈敏度下降。
洗板必須充分，殘液會造成非特異性結(jié)合，背景偏高。
終止后需快速讀數(shù)，放置過久吸光度會漂移，結(jié)果失真。
終止液含稀硫酸，避免接觸皮膚、眼睛，若不慎接觸大量清水沖洗。
實驗廢棄物按生物安全廢棄物規(guī)范處理。
不同批次試劑盒組分不可混用。
試劑盒運輸全程 2～8℃冷鏈，嚴禁高溫暴曬。
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實驗操作流程：
樣本預(yù)處理：心肌 / 骨骼肌組織勻漿離心取上清，血清樣本避免溶血，按照試劑盒要求比例稀釋樣本，渦旋振蕩 1min 混勻。
微孔板加樣排布：MLC 包被酶標(biāo)板分設(shè)空白、標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本孔，每孔加入對應(yīng)液體 100μL，標(biāo)準(zhǔn)品從高濃度到低濃度依次添加。
一步法添加酶標(biāo)記抗體：直接向所有孔內(nèi)加入 HRP 標(biāo)記檢測抗體 60μL，封板前輕晃混勻。
避光恒溫孵育：37℃封閉孵育 60min，保證抗原與包被抗體、酶標(biāo)抗體夾心結(jié)合。
洗滌去除游離雜質(zhì)：傾倒孔內(nèi)液體，洗滌液浸泡洗板 4 次，每次浸泡 25s，吸水紙拍干殘留液體。
底物顯色培育：每孔分別加入顯色 A、B 液各 50μL，避光 37℃顯色 14min。
終止檢測分析：滴加終止液 50μL，酶標(biāo)儀 450nm 讀取吸光度，計算樣本 MLC 濃度。
關(guān)鍵字： 人肌球蛋白輕鏈;MLC;ELISA試劑盒;
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