本試劑盒采用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，預先將純化的脊髓灰質炎病毒抗原包被于微孔板孔內，封閉非特異性結合位點后，加入待測人血清樣本，樣本中若存在脊髓灰質炎病毒IgG抗體，可與固相抗原特異性結合；充分洗滌去除未結合物質后，加入酶標記抗人IgG二抗，使其與結合在固相上的特異性抗體結合，再次洗滌干凈后加入底物顯色液進行顯色反應，最后加入終止液終止反應，通過酶標儀測定各孔吸光度值，吸光度值與樣本中人脊髓灰質炎病毒IgG抗體含量呈正相關，對照標準曲線即可精準計算樣本中抗體濃度。
產品參數：

?靈敏度：最低可檢測 PV-IgG 濃度 1.5ng/mL

檢測范圍：3.125~100ng/mL

反應時間：樣本孵育 60min，酶結合物孵育 30min，底物顯色 15min，總時長約 115min

保存條件：試劑盒整體 2~8℃避光密封保存，避免凍融；開封后組分 1 個月內用完

顯色系統(tǒng)：TMB 單組分顯色液，過氧化氫酶促顯色

檢測波長：主波長 450nm，參比波長 630nm

標準曲線繪制：以標準品濃度為 X 軸，對應 OD 值為 Y 軸，采用四參數 Logistic 擬合構建標準曲線，樣本濃度由曲線方程換算得出

注意事項：血清樣本需避免溶血、脂血；洗板步驟必須充分，防止非特異性結合干擾結果；底物液不可接觸強氧化劑
實驗前準備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標板、標準品、酶結合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標簽標注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標準品復溶 / 梯度稀釋：

凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品，單獨標記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復凍融。

待測樣本預處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴重樣本棄用。

2. 耗材與設備準備

設備：恒溫 37℃孵育箱、酶標儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準。

取出本次實驗所需酶標板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標記

酶標板做好分區(qū)標記：空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔（所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差）。

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實驗操作流程：

試劑盒室溫平衡 30min，拆封酶標板條，設置空白孔、陰性對照孔、陽性對照孔與待測樣本孔，每孔加入稀釋后樣本 100μL，空白孔加樣本稀釋液。

向所有檢測孔內直接加入酶結合工作液 50μL，輕柔震蕩酶標板混勻孔內液體，封板膜密封酶標板。

37℃恒溫孵育 60min，孵育期間避免酶標板堆疊放置，防止受熱不均影響結合反應。

小心撕去封板膜，棄去孔內全部液體，每孔加滿洗滌緩沖液，靜置 30s 后拍干，重復洗板 5 次，每次洗板后在吸水紙上充分扣干殘留液體。

依次向每孔加入顯色底物 A 液 50μL、顯色底物 B 液 50μL，避光環(huán)境下 37℃孵育 15min 進行顯色反應。

每孔快速加入終止液 50μL，輕輕晃動酶標板混勻，終止酶促顯色反應。

酶標儀設定 450nm 波長，以空白孔調零，測定各孔 OD 吸光度值，對照試劑盒標準曲線計算樣本中 PV-IgG 含量。