本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA檢測(cè)原理，微孔板預(yù)先包被甲胺喋呤特異性抗原，檢測(cè)時(shí)將待測(cè)樣本與定量的酶標(biāo)記甲胺喋呤一同加入微孔中，樣本中的甲胺喋呤與酶標(biāo)記甲胺喋呤會(huì)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合微孔板上的固相抗體；孵育反應(yīng)結(jié)束后洗滌去除未結(jié)合的游離物質(zhì)，加入底物液發(fā)生酶促顯色反應(yīng)，顯色深淺與樣本中甲胺喋呤的含量呈負(fù)相關(guān)，即樣本中甲胺喋呤濃度越高，競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合的固相位點(diǎn)越多，酶標(biāo)記物結(jié)合量越少，最終吸光度值越低，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線可定量測(cè)定樣本中甲胺喋呤含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：檢出下限 0.08nmol/L

檢測(cè)范圍：0.2~12.8nmol/L

反應(yīng)時(shí)間：競(jìng)爭(zhēng)法一抗孵育 45min，二抗結(jié)合 30min，顯色終止 10min，全程 90min

保存條件：未拆封 2~8℃儲(chǔ)存；濃縮洗滌液室溫存放即可，其余試劑嚴(yán)禁冷凍

顯色系統(tǒng)：雙組分 A+B TMB 顯色體系

檢測(cè)波長(zhǎng)：?jiǎn)尾ㄩL(zhǎng) 450nm 直接讀數(shù)

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：采用半對(duì)數(shù)坐標(biāo)繪圖，X 軸標(biāo)準(zhǔn)品濃度對(duì)數(shù)，Y 軸抑制率 OD 值，線性回歸擬合曲線計(jì)算樣本含量

注意事項(xiàng)：用藥后血漿樣本需低溫分離；試劑使用前回溫至室溫；終止液為稀硫酸，避免皮膚黏膜接觸
關(guān)鍵注意事項(xiàng)：

本試劑盒僅科研體外檢測(cè)，嚴(yán)禁臨床診斷使用。

全程避免試劑、板條強(qiáng)光直射，TMB 見光易失效。

移液器吸頭一次性使用，杜絕交叉污染；所有操作無酶、無熱源。

孵育溫度嚴(yán)格控制 37℃，溫度偏低會(huì)降低 OD 值、靈敏度下降。

洗板必須充分，殘液會(huì)造成非特異性結(jié)合，背景偏高。

終止后需快速讀數(shù)，放置過久吸光度會(huì)漂移，結(jié)果失真。

終止液含稀硫酸，避免接觸皮膚、眼睛，若不慎接觸大量清水沖洗。

實(shí)驗(yàn)廢棄物按生物安全廢棄物規(guī)范處理。

不同批次試劑盒組分不可混用。

試劑盒運(yùn)輸全程 2～8℃冷鏈，嚴(yán)禁高溫暴曬。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

將試劑盒所有組分放置室溫環(huán)境復(fù)溫 25min，取出所需酶標(biāo)板，預(yù)留標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔、空白孔，各孔添加對(duì)應(yīng)稀釋樣品 100μL，空白孔補(bǔ)加等量稀釋液。

無需洗板，直接于每孔添加酶標(biāo)記抗原工作液 60μL，低速搖晃酶標(biāo)板 15s 混勻，覆膜封閉板口。

置于 37℃溫箱避光孵育 55min，全程杜絕陽光直射干擾抗原抗體特異性結(jié)合。

揭開封板膜，傾倒孔中廢液，每孔注滿洗滌液浸泡 40s 后甩干，循環(huán)洗板 4 次，最后一次徹底拍凈孔內(nèi)殘液。

每孔先后加入顯色液 A、顯色液 B 各 50μL，避光 37℃恒溫顯色 12min，觀察孔內(nèi)藍(lán)色漸變程度。

每孔滴加終止液 50μL，水平輕晃酶標(biāo)板使液體混合均勻，顯色由藍(lán)變黃即代表反應(yīng)終止。

立即使用酶標(biāo)儀在 450nm 檢測(cè)各孔光密度值，依托標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度繪制曲線，換算樣本 MTX 濃度。