本試劑盒依托雙抗體夾心ELISA檢測原理,固相微孔板固定人食欲素受體(OXR)特異性抗體,待測樣本、標準品中的OXR抗原與固相抗體發(fā)生特異性免疫結(jié)合,洗滌去除游離雜質(zhì)后加入酶標記檢測抗體,構(gòu)建夾心免疫復合物,經(jīng)顯色、終止反應后測定吸光度,吸光度數(shù)值與樣本中OXR的濃度呈線性相關(guān),通過標準曲線可準確計算樣本靶標含量。
基本參數(shù)?:

產(chǎn)品名稱:人食欲素受體(OXR)ELISA試劑盒
英文名稱:OXR Elisa Kit
貨號:Y-E635
規(guī)格:48T/96T
靈敏度:最低檢出 1.7ng/L
檢測范圍:9ng/L ~ 690ng/L
反應時間:室溫孵育 76min,酶二抗 54min,避光顯色 21min,總時長 2h31min
保存條件:未拆封試劑盒 2~8℃,標準品干粉 - 20℃保存,復溶后不可二次凍存
顯色系統(tǒng):即用型 TMB 顯色液,2mol/L 硫酸終止
檢測波長:450nm 單波長測定
標準曲線繪制:半對數(shù)線性回歸,7 組標準品濃度梯度
注意事項:細胞裂解上清需去除核酸沉淀雜質(zhì);加樣時槍頭切勿戳破包被膜
實驗前準備工作:

1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分(酶標板、標準品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液)從 2~8℃取出,室溫(20~25℃)放置平衡 30min,嚴禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制:按標簽標注比例用去離子純水稀釋(常見 20× 濃縮液:1 份濃縮液 + 19 份純水),混勻備用,現(xiàn)配現(xiàn)用。
標準品復溶 / 梯度稀釋:
凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解,室溫靜置 10min,輕柔吹打混勻;
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品,單獨標記,剩余原液分裝 - 20℃避光保存,避免反復凍融。
待測樣本預處理:血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋,渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清;溶血、脂血嚴重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準備
設(shè)備:恒溫 37℃孵育箱、酶標儀(450nm 主波長,630nm 參比)、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(或手動洗板槽)、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染,移液槍提前校準。
取出本次實驗所需酶標板條,剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋,加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標記
酶標板做好分區(qū)標記:空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔(所有樣本、標準品建議設(shè)置雙復孔降低誤差)。
實驗步驟如下:

試劑盒室溫回溫 28min,配制洗滌工作液,倍比稀釋 OXR 標準品,拆分所需酶標板條。
標準孔添加 50μL 梯度標準品;樣本孔加 50μL 稀釋液 + 10μL 樣本;空白孔空置不加液。
非空白孔加入酶結(jié)合 OXR 特異性抗體 100μL,封板 37℃孵育 61min。
撕膜倒掉廢液,洗滌液加滿每孔靜置 33s,甩干洗板 5 次,充分拍干殘液。
顯色 A、B 液各 50μL 加入每孔,混勻后避光顯色 15min。
滴加終止液 50μL 混勻終止反應。
酶標儀 450nm 讀取吸光度,計算樣本 OXR 含量。
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