本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附技術(shù),微孔板預(yù)先包被抗人sLOX-1特異性抗體,待測(cè)樣本中的可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)抗原與固相抗體結(jié)合,洗滌后加入酶標(biāo)記配對(duì)抗體形成夾心復(fù)合物,顯色后檢測(cè)吸光度,定量檢測(cè)樣本中sLOX-1濃度。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱 | 人可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E763 |
英文名稱 | sLOX-1 Elisa Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度:檢出限 0.22 ng/mL
檢測(cè)范圍:0.1 ng/mL ~ 6.4 ng/mL
反應(yīng)時(shí)間:室溫孵育 82min,二抗 48min,顯色 19min
保存條件:2~8℃冷藏,板條拆分后裝入自封袋加干燥劑
顯色系統(tǒng):?jiǎn)我?/span> TMB 顯色體系
檢測(cè)波長(zhǎng):450nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:軟件導(dǎo)入標(biāo)準(zhǔn)品 OD 值自動(dòng)生成標(biāo)準(zhǔn)曲線換算結(jié)果
注意事項(xiàng):操作全程盡量避光,尤其顯色步驟光照會(huì)加速底物失效
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作:
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分(酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液)從 2~8℃取出,室溫(20~25℃)放置平衡 30min,嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制:按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋(常見(jiàn) 20× 濃縮液:1 份濃縮液 + 19 份純水),混勻備用,現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋:
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解,室溫靜置 10min,輕柔吹打混勻;
按說(shuō)明書(shū)梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品,單獨(dú)標(biāo)記,剩余原液分裝 - 20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理:血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋,渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清;溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備:恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀(450nm 主波長(zhǎng),630nm 參比)、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)(或手動(dòng)洗板槽)、封板膜、離心管。
耗材無(wú)核酸酶、無(wú)熱源、無(wú)蛋白污染,移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條,剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋,加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記:空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔(所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差)。
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實(shí)驗(yàn)操作流程:
試劑盒室溫放置 36min,取出酶標(biāo)板,規(guī)劃全部實(shí)驗(yàn)分組孔位。
各孔加入對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品或樣本 50μL,緊接著加入酶標(biāo)記試劑 50μL,封板覆膜。
水平震蕩混勻,37℃孵育 69min。
棄廢液,洗滌液浸泡 39s,吸水紙拍干,洗板 6 次。
顯色底物 A、B 每孔 50μL,避光顯色 19min。
終止液 50μL 加入終止酶促反應(yīng)。
450nm 波長(zhǎng)測(cè)值,標(biāo)準(zhǔn)曲線定量 sLOX-1。
關(guān)鍵字: 人可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1;sLOX-1;ELISA試劑盒;
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