本試劑盒以雙抗體夾心ELISA為核心檢測原理，將抗人葡萄糖激酶特異性抗體固定于酶標(biāo)板微孔內(nèi)壁。待測樣本、梯度標(biāo)準(zhǔn)品加入微孔后，其中的葡萄糖激酶抗原與固相抗體特異性結(jié)合，經(jīng)洗滌去除游離雜質(zhì)后，加入酶標(biāo)記二抗并孵育結(jié)合，形成穩(wěn)定的固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，隨后進行底物顯色、終止反應(yīng)操作，通過檢測吸光度數(shù)值，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線即可定量測定樣本中葡萄糖激酶的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢出 0.09ng/mL

檢測范圍：0.28ng/mL～17.9ng/mL

反應(yīng)時間：加樣后溫育 58min，二抗孵育 52min，顯色 17min

保存條件：試劑盒 2～8℃避光儲存，不可倒置存放；濃縮試劑使用前充分顛倒混勻

顯色系統(tǒng)：A、B 液等量混合現(xiàn)配 TMB 顯色體系

檢測波長：主 450nm，參比 650nm

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：線性最小二乘法回歸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

注意事項：底物液需避光保存，見光氧化失效后不得繼續(xù)使用
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑室溫回溫 30min，稀釋濃縮洗滌緩沖液；拆分酶標(biāo)板條并標(biāo)注組別。

標(biāo)準(zhǔn)品孔添加梯度稀釋 GCK 標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣本孔加入處理后待測樣本 50μL，空白孔空置。

各檢測孔加入一步法酶標(biāo)記一抗工作液 100μL，封板密封酶標(biāo)板。

37℃避光條件下孵育 70min，減少環(huán)境光線干擾。

棄凈孔內(nèi)液體，洗滌液洗板每次浸泡 35s，一共洗滌 4 次，吸水紙拍干殘余液體。

每孔加入顯色底物混合液 100μL，37℃避光顯色 16min。

加入終止液 50μL 混勻，10min 內(nèi) 450nm 測 OD 值，計算樣本 GCK 濃度。