本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA檢測原理，微孔板固相包被HLA-G特異性抗體，實(shí)驗(yàn)中樣本內(nèi)的人類白細(xì)胞抗原G與包被抗體特異性結(jié)合，隨后加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體，形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，充分洗滌后加入顯色底物進(jìn)行催化顯色，顯色強(qiáng)度與樣本中HLA-G含量成正比，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線吸光度數(shù)值可定量檢測樣本中HLA-G的表達(dá)水平。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 人類白細(xì)胞抗原G(HLA-G)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E2814 |
英文名稱 | HLA-G ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低檢測限≤0.03ng/mL
檢測范圍：0.08ng/mL–8ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：一抗結(jié)合 50min，酶標(biāo)二抗 40min，顯色 12min，整體流程約 2h10min
保存條件：整套試劑盒 2～8℃冷藏，禁止冷凍；濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶 37℃水浴融化后使用
顯色系統(tǒng)：A、B 雙液混合 TMB 顯色體系
檢測波長：單波長 450nm 直接讀數(shù)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：標(biāo)準(zhǔn)品做 7 個(gè)梯度稀釋，線性回歸擬合曲線計(jì)算樣本濃度
注意事項(xiàng)：血清樣本需無溶血、無脂血；終止液具有腐蝕性，避免接觸皮膚黏膜
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
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實(shí)驗(yàn)操作流程：
樣本預(yù)處理：離心分離待測生物樣本，去除雜質(zhì)沉淀，用樣本稀釋液按規(guī)定倍數(shù)稀釋，顛倒混勻；
加樣布設(shè)：酶標(biāo)板預(yù)留空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品梯度孔、待測樣品孔，每孔精準(zhǔn)添加對(duì)應(yīng)液體 100μL；
酶標(biāo)共孵：無需洗板，直接向全部加樣孔加入酶標(biāo)記抗體工作液，覆膜封口，37℃水浴孵育 45min；
反復(fù)洗板：傾倒孔內(nèi)廢液，洗板液注滿每孔靜置 25s，倒扣拍干，連續(xù)洗滌 4 輪，徹底去除未結(jié)合反應(yīng)物；
避光顯色：每孔依次加入 TMB 顯色液 A 液與 B 液，避光環(huán)境下 37℃孵育 12min，觀察孔內(nèi)藍(lán)色顯色程度；
終止液終止：每孔加入終止液終止酶促反應(yīng)，輕微震蕩酶標(biāo)板使其混勻均勻；
上機(jī)檢測：酶標(biāo)儀設(shè)定主波長 450nm、參比波長 630nm 讀取吸光度，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本 HLA-G 含量。
關(guān)鍵字： 人類白細(xì)胞抗原G;HLA-G;ELISA試劑盒;
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